秦川牛胎儿骨骼肌卫星细胞的分离培养

编号 zgly0000807282

文献类型 期刊论文

文献题名 秦川牛胎儿骨骼肌卫星细胞的分离培养

作者 何玉龙  刘琴  张涌 

作者单位 西北农林科技大学动物科技学院  宁夏大学西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室  宁夏大学生命科学学院 

母体文献 西北农林科技大学学报: 自然科学版 

年卷期 2012(6)

页码 1-6

年份 2012 

分类号 Q813.11 

关键词 秦川牛  骨骼肌卫星细胞  培养  EGFP基因 

文摘内容 【目的】:探索胎牛骨骼肌卫星细胞分离、培养、鉴定及基因转染的方法。【方法】:分别采用Ⅰ型胶原酶消化、Ⅰ型胶原酶与胰蛋白酶二步消化及链霉蛋白酶消化法对胎牛骨骼肌卫星细胞进行培养,比较了3种不同分离方法所得细胞数及其存活率的差异;利用差速贴壁法和Percoll密度梯度离心相结合的方法纯化骨骼肌卫星细胞,对纯化后的细胞进行myostatin基因RT-PCR以及结蛋白(Desmin)免疫细胞化学染色鉴定,最后通过电转染法对纯化的骨骼肌卫星细胞进行EGFP基因转染研究。【结果】:3种消化培养方法中,以链霉蛋白酶消化法分离得到的胎牛骨骼肌卫星细胞数显著高于其它2种方法(P〈0.05),但细胞存活率较低(P〈0.05);而采用Ⅰ型胶原酶与胰蛋白酶二步消化法可以得到相对较高的细胞数及存活率。利用差速贴壁和Percoll密度梯度离心相结合的方法可以得到纯化的骨骼肌卫星细胞;电转染法适用于骨骼肌卫星细胞的基因转染。【结论】:建立了胎牛骨骼肌卫星细胞分离、培养、纯化、鉴定及基因转染的方法,为通过转基因方法改良秦川牛产肉性能研究奠定了基础。