有害疣孢霉Hypomyces perniciosus遗传转化体系的建立及其突变体库的构建

编号 zgly0001645282

文献类型 期刊论文

文献题名 有害疣孢霉Hypomyces perniciosus遗传转化体系的建立及其突变体库的构建

作者 纪策  刘源  李丹  SossahFrederickLeo  杨阳  付永平  李玉 

作者单位 吉林农业大学食药用菌教育部工程研究中心 

母体文献 菌物学报 

年卷期 2018年08期

年份 2018 

分类号 S436.46 

关键词 有害疣孢霉  农杆菌  转化  突变体库  表型变异 

文摘内容 有害疣孢霉Hypomyces perniciosus是引起双孢蘑菇Agaricus bisporus湿泡病的病原真菌,目前其致病分子机理尚不清楚,而高效稳定的遗传转化体系和突变体库构建是挖掘和研究病原菌致病基因的基础和有效手段。因此,本实验以高致病力的有害疣孢霉菌株WH001为研究对象,采用冻融法将双元载体p BHt1转入农杆菌AGL-1中,建立并优化根癌农杆菌介导的遗传转化体系,并利用其构建T-DNA插入突变体库。结果表明有害疣孢霉菌株WH001的潮霉素(Hygromycin,Hyg)耐受浓度为250ng/L,当农杆菌侵染液浓度OD600=1,侵染时间为30min,乙酰丁香酮(Acetosyringone,AS)浓度为1.5mg/mL,共培养时间为3d时,转化体系效率最高。然后利用该优化体系构建有害疣孢霉的突变体库,通过PCR检测和形态学鉴定获得若干表型发生改变、稳定遗传的T-DNA插入突变体,与原菌种WH001相比,突变体在菌丝形态、生长速率、色素分泌和致病力等方面发生改变。本研究为进一步挖掘有害疣孢霉未知基因功能、解析生物学性状、探讨致病分子机制奠定基础。