小金海棠二价铁转运蛋白基因MxIRT1定点突变的研究

编号 zgly0001338071

文献类型 期刊论文

文献题名 小金海棠二价铁转运蛋白基因MxIRT1定点突变的研究

作者 张学宁  孔瑾  王忆  韩振海  许雪峰 

作者单位 中国农业大学果树逆境生理与分子生物学实验室  中国农业大学果树逆境生理与分子生物学实验室 北京100094  北京100094 

母体文献 园艺学报 

年卷期 2008年02期

年份 2008 

分类号 S66 

关键词 小金海棠  基因突变  定点突变技术  二价铁转运蛋白基因  缺铁病 

文摘内容 采用PCR技术对小金海棠(Malus xiaojinensis)二价铁转运蛋白基因MxIRT1的定点突变体系进行了探讨。根据MxIRT1开放阅读框(ORF)两端和突变位点序列各设计一对引物。通过PCR扩增,获得带有突变位点且在突变位点相互重叠的两个PCR片段。对以上两个片段的浓度进行调整后,将其用作PCR反应的模板。对退火温度和延伸时间进行优化后,利用ORF两端引物,将带有突变位点的两个片段拼接起来,从而获得了含有所要突变位点的MxIRT1,并将其插入pEASY-T2载体中。DNA序列分析表明在预期位点上已经发生了突变:MxIRT1编码的第186位密码子已由组氨酸残基变为丙氨酸残基,证明用PCR技术已成功地使MxIRT1基因发生突变。整个突变过程不需要任何回收与纯化步骤,是一个高效、快捷的定点突变体系。