编号 zgly0001338071
文献类型 期刊论文
文献题名 小金海棠二价铁转运蛋白基因MxIRT1定点突变的研究
作者单位 中国农业大学果树逆境生理与分子生物学实验室 中国农业大学果树逆境生理与分子生物学实验室 北京100094 北京100094
母体文献 园艺学报
年卷期 2008年02期
年份 2008
分类号 S66
关键词 小金海棠 基因突变 定点突变技术 二价铁转运蛋白基因 缺铁病
文摘内容 采用PCR技术对小金海棠(Malus xiaojinensis)二价铁转运蛋白基因MxIRT1的定点突变体系进行了探讨。根据MxIRT1开放阅读框(ORF)两端和突变位点序列各设计一对引物。通过PCR扩增,获得带有突变位点且在突变位点相互重叠的两个PCR片段。对以上两个片段的浓度进行调整后,将其用作PCR反应的模板。对退火温度和延伸时间进行优化后,利用ORF两端引物,将带有突变位点的两个片段拼接起来,从而获得了含有所要突变位点的MxIRT1,并将其插入pEASY-T2载体中。DNA序列分析表明在预期位点上已经发生了突变:MxIRT1编码的第186位密码子已由组氨酸残基变为丙氨酸残基,证明用PCR技术已成功地使MxIRT1基因发生突变。整个突变过程不需要任何回收与纯化步骤,是一个高效、快捷的定点突变体系。