羊口疮病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

编号 zgly0001423020

文献类型 期刊论文

文献题名 羊口疮病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

作者 姚俊  李富祥  彭海生  鲁富有  张乔明  李华春 

作者单位 云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室  云南省普洱市动物疫病预防控制中心 

母体文献 动物医学进展 

年卷期 2012年11期

年份 2012 

分类号 S858.26 

关键词 羊口疮病毒  TaqMan  实时荧光定量PCR  建立  应用 

文摘内容 根据GenBank中的羊口疮病毒基因组(AY386264)ORFVgORF121及ORFVgORF122基因的DNA序列,应用Beacon Designer 7.7软件设计一对引物和一条TaqMan探针,以含有该引物扩增序列的重组质粒作为阳性标准品,建立了羊口疮病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。该方法组内及组间重复试验变异系数均低于2%,上机检测时间不超过40min,检测灵敏度达1×101copies/μL,山羊痘及禽痘病毒特异性检测均为阴性,标准曲线的相关系数(R2)为0.998 088,线性关系良好。应用该方法对云南保山和普洱送检的羊口疮临床组织病料进行绝对定量检测,送检样品抽提DNA中病毒拷贝数分别为1.35×108copies/μL和9.62×107copies/μL。结果表明,研究建立的羊口疮病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法具有特异、灵敏、稳定、快速和安全的特点,适于羊口疮临床组织样品的早期检测及常规病原监测。