墨兰B类PI基因多靶点CRISPR/Cas9载体构建

编号 zgly0001652558

文献类型 期刊论文

文献题名 墨兰B类PI基因多靶点CRISPR/Cas9载体构建

作者 吴林鲜  兰晓天  朱永平  胡淞  田英男  冯磊  刘修远  万希文  何静  和凤美 

作者单位 云南农业大学 

母体文献 分子植物育种 

年卷期 2018年21期

年份 2018 

分类号 S682.31 

关键词 CRISPR/Cas9  墨兰  MADS-box  PI  基因功能 

文摘内容 MADS基因家族对植物成花具有重要作用,在兰花中,目前还没有利用CRISPR/Cas9进行基因编辑的相关报道。墨兰(Cymbidium sinense) B类PISTILLATA (PI)基因可能与墨兰舌瓣的形成有关,为了进一步验证其PI基因的功能,本研究利用在线软件CRISPR-P设计3个靶点,并采用Overlapping-PCR技术和Golden Gate cloning策略构建了墨兰PI基因CRISPR/Cas9的多重sg RNA载体系统,经PCR、酶切和测序验证,植物编辑载体已构建成功。为在墨兰中实现该基因的定向突变提供了理论依据,同时也为在兰花基因组中应用CRISPR/Cas9基因编辑技术进行基因的定点突变修饰提供参考。