韧皮部特异启动子驱动密码子优化的抗菌肽D基因的植物表达载体构建

编号 zgly0001304014

文献类型 期刊论文

文献题名 韧皮部特异启动子驱动密码子优化的抗菌肽D基因的植物表达载体构建

作者 胡桂兵  张上隆  徐昌杰  林顺权 

作者单位 浙江大学果树科学研究所  华南农业大学园艺生物技术研究所 杭州310029 华南农业大学园艺生物技术研究所  广州510642  杭州310029  广州510642 

母体文献 果树学报 

年卷期 2005年06期

年份 2005 

分类号 S666 

关键词 柑橘  密码子优化  抗菌肽D基因  韧皮部特异启动子  植物表达载体 

文摘内容 根据177个GenBank中登录的柑橘编码蛋白密码子用法的分析结果,优化并重新设计和合成了含柑橘偏爱密码子、对柑橘黄龙病有杀灭作用的柞蚕抗菌肽D基因(命名为CAPD),克隆入pUC19克隆载体并经测序验证后,获得了含新抗病基因的重组质粒pUC19-CAPD。用限制性内切酶BamHI和SacI双酶切pUC19-CAPD克隆载体和pBI121植物表达载体的质粒DNA,回收pUC19-CAPD克隆载体中的CAPD基因小片段和pBI121植物表达载体中去掉GUS报告基因的大片段,经连接、转化和鉴定后,构建了由CaMV35S组成型启动子(35SP)驱动CAPD目的基因的新植物表达载体(命名为pHZ05);用限制性内切酶BamHI和HindIII双酶切含笋瓜韧皮部特异启动子(PSP)的pUCm-PSP克隆载体和pHZ05植物表达载体的质粒DNA,分别回收pUCm-PSP克隆载体中的PSP小片段和pHZ05植物表达载体中去掉CAPD目的基因上游35SP的大片段,经连接、转化和鉴定后,构建了由PSP驱动CAPD目的基因的新植物表达载体(命名为pHZ06)。利用细胞感受态法直接将2个由不同启动子驱动的含CAPD目的基因的新重组植物表达载体分别导入根癌农杆菌LBA4404、GV3101、EHA105和发根农杆菌Ri15834等4个农杆菌菌株中,为利用农杆菌介导的遗传转化技术培育抵抗由韧皮部传导的毁灭性和检疫性病害柑橘黄龙病的新种质奠定了基础。