EIAV基因转移载体转录后调控元件的优化

编号 zgly0000556708

文献类型 期刊论文

文献题名 EIAV基因转移载体转录后调控元件的优化

作者 李亚明  韩凌霞  曲连东  司昌德  秦海斌  杨增岐  于海波  徐佳 

作者单位 西北农林科技大学动物医学院  中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物中心农业部实验动物质量监督检验测试中心 

母体文献 西北农林科技大学学报 

年卷期 2008,36(2)

页码 1-6

年份 2008 

分类号 Q939.47 

关键词 马传染性贫血病毒  土拨鼠肝炎病毒  转录后调控元件  基因转移载体  增强绿色荧光蛋白 

文摘内容 【目的】为了提高马传染性贫血病毒(EIAV)基因转移载体质粒pcPPTPRE(＋)的外源蛋白表达能力，对其转录后调控元件进行优化。【方法】将PCR扩增土拨鼠肝炎病毒(Woodchuck Hepatitis Virus，WHV)转录后调控元件(WPRE)，克隆于pGM-T载体获得重组质粒pGM—WPRE，利用NotⅠ酶将WPRE亚克隆入pcPPTPRE(＋)，筛选WPRE正向连接的重组质粒pcPPTWPRE，采用磷酸钙法分别将pcPPTWPRE和pcPPTPRE(＋)转染HEK293细胞和DF-1细胞，利用荧光显微镜观察EGFP蛋白的表达，利用流式细胞仪检测转染细胞中EGFP阳性细胞的表达率。【结果】在HEK293细胞中，pcPPTWPRE表达外源基因的能力极显著优于pcPPTPRE(＋)；在DF-1细胞中，pcPPTWPRE与pcPPTPRE(＋)表达外源基因的能力均不强，但前者略优于后者。【结论】土拨鼠肝炎病毒转录后，调控元件(WPRE)可以明显增强EIAV载体质粒的外源蛋白表达能力，为高表达能力伪型EIAV重组病毒的获得奠定了基础，同时也为其他病毒载体的构建提供了借鉴。