反义磷脂酶Dγ基因与几丁质酶基因转化美洲黑杨G2

编号 zgly0000398842

文献类型 期刊论文

文献题名 反义磷脂酶Dγ基因与几丁质酶基因转化美洲黑杨G2

学科分类 220.1520;林木遗传学

作者 邹维华  赵强  崔德才  王斌 

作者单位 山东农业大学生命科学学院  中国农业科学院生物技术研究所  中国科学院遗传与发育生物学研究所 

母体文献 林业科学 

年卷期 2006,42(1)

页码 37-42

年份 2006 

分类号 S718.46  Q943.2 

关键词 美洲黑杨  反义磷脂酶Dγ基因  几丁质酶基因  耐盐  抗病 

文摘内容 建立美洲黑杨G2组培再生体系, 确立美洲黑杨G2分化最适宜培养基和生根培养基。然后分别进行卡那霉素和潮霉素敏感性试验, 利用叶盘法依次将反义磷脂酶DT(Anti-PLDγ)基因和几丁质酶(CH5B)基因转入美洲黑杨G2中。首先转入反义磷脂酶D7基因, 经诱导不定芽及生根阶段卡那霉素(选择性抗生素)连续筛选, 获得了21株卡那霉素抗性植株。抗性植株经PCR及PCR-Southern杂交检测, 有13株均呈阳性, 证明Anti-PLDT基因成功整合到美洲黑杨G2基因组中。耐盐性试验表明, 4株转基因植株抗NaCl能力比对照都有不同程度提高。选择4号株系继续转入几丁质酶基因, 通过潮霉素(选择性抗生素)筛选不定芽及诱导生根获6株潮霉素抗性植株。经PCR及PCR-Southem杂交检测, 6株均呈阳性, 证明CH5B基因成功整合到美洲黑杨G2基因组中。由于CH5B基因与报告基因GUS处于同一开放阅读框(ORF)内, 因此通过GUS基因的组织化学染色分析, 证明了6株转化植株几丁质酶基因均获得正常表达。