苹果花粉中与花柱S-RNase互作的γ-硫堇筛选及鉴定

编号 zgly0001398114

文献类型 期刊论文

文献题名 苹果花粉中与花柱S-RNase互作的γ-硫堇筛选及鉴定

作者 孙会玲  孟冬  白松龄  胡建芳  李天忠 

作者单位 中国农业大学农学与生物技术学院果树细胞与分子育种实验室 

母体文献 园艺学报 

年卷期 2011年08期

年份 2011 

分类号 S661.1 

关键词 苹果  S-RNase  自交不亲和  花粉cDNA文库  酵母双杂交  γ-硫堇 

文摘内容 以‘国光’苹果(S1S2)花粉为材料,成功构建了酵母pGADT7-cDNA文库,转化效率约为1.2×106.μg-1,插入片段大小在300~2000bp之间。通过酵母双杂交方法,用苹果S2-RNase的C2HVC3区筛选文库获得一个长505bp的cDNA片段,经分析发现该cDNA序列上有一个261bp的开放阅读框(ORF),该ORF编码一个具N端信号肽的多肽,该成熟多肽由64个氨基酸组成,富含带正电荷的赖氨酸和精氨酸,其C端有8个半胱氨酸和一个γ-硫堇功能域,结构预测显示其具有一个α螺旋,3个β折叠,4个二硫键,由此,推断其为苹果γ-硫堇,命名为MdD1。RT-PCR分析发现:MdD1基因在‘国光’苹果叶片、萼片、花瓣、子房、花药和花柱等组织中都有表达,但花药中表达量最高。酵母双杂交结果表明MdD1除了与苹果S2-RNase的C2HVC3区互作外,还与S1-RNase的C2HVC3区,S1、S2-RNase的成熟多肽区存在互作。初步认为:苹果γ-硫堇可能通过与S-RNase非特异性互作,作为花粉非S因子参与自交不亲和反应。