多重PCR法区分枣园两种菱纹叶蝉及检测其体内枣疯病植原体

编号 zgly0001495728

文献类型 期刊论文

文献题名 多重PCR法区分枣园两种菱纹叶蝉及检测其体内枣疯病植原体

作者 郝少东  陈昱圻  王进忠  王合  陶万强  张志勇  石小玉  周赛 

作者单位 北京农学院植物科学技术学院农业应用新技术北京市重点实验室  北京市林业保护站 

母体文献 昆虫学报 

年卷期 2015年03期

年份 2015 

分类号 S436.65 

关键词 凹缘菱纹叶蝉  片突菱纹叶蝉  枣疯病  植原体  多重PCR  分子鉴定 

文摘内容 【目的】目前发现,北京枣园中的凹缘菱纹叶蝉Hishimonus sellatus(Uhler)和片突菱纹叶蝉Hishimonus lamellatus Cai混同发生。已知凹缘菱纹叶蝉可以传播枣疯病,而片突菱纹叶蝉是否携带枣疯病植原体尚待证明。正确鉴别区分枣园中菱纹叶蝉的种类并测定其体内感染枣疯病植原体情况有助于阐明田间枣疯病的流行规律,从而提出有效的预防枣疯病及其媒介昆虫措施显得十分重要。传统形态学鉴定两种菱纹叶蝉种类的方法局限于雄性成虫外生殖器,本研究目的在于建立一种快速的分子生物学方法,在区分枣园中两种枣菱纹叶蝉的同时,可检测虫体内的枣疯病植原体。【方法】以凹缘菱纹叶蝉和片突菱纹叶蝉的COI基因以及枣疯病植原体的16S r DNA为扩增目标,分别设计引物,建立一种包含3对引物的多重PCR体系。测试该多重PCR体系对叶蝉总DNA的灵敏度、准确性,以及当两种叶蝉DNA同时存在时的辨别能力和对枣疯病植原体16S r DNA的灵敏度。【结果】该多重PCR可以准确区分凹缘菱纹叶蝉和片突菱纹叶蝉,并对虫体内枣疯病植原体实现检测,其对昆虫总DNA的灵敏度达到0.012 ng,对枣疯病植原体16S r DNA模板的灵敏度达到900拷贝。【结论】该方法极大方便了对枣菱纹叶蝉的田间种群发生动态及虫体中枣疯病植原体感染的监测。