利用桥梁载体策略构建水稻条斑病菌T3SS基因诱导表达检测体系

编号 zgly0001693280

文献类型 期刊论文

文献题名 利用桥梁载体策略构建水稻条斑病菌T3SS基因诱导表达检测体系

作者 吾尼尔别克·美丽  杨小菲  张翠萍  杨瑞环  李生樟  李逸朗  陈功友  陈晓斌  邹丽芳 

作者单位 上海交通大学农业与生物学院 

母体文献 植物病理学报 

年卷期 2019年06期

年份 2019 

分类号 S435.111 

关键词 水稻条斑病菌  T3SS基因  启动子探针载体  蛋白表达载体 

文摘内容 水稻条斑病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzicola,Xoc)侵染水稻,引起细菌性条斑病(bacterial leaf streak, BLS)。Xoc主要依靠hrp基因簇(T3SS基因)编码的III型分泌系统(type III secretion system, T3SS)将效应蛋白注入水稻细胞中,激发寄主水稻的感(抗)病性。为了准确在Xoc中进行T3SS基因表达调控的分析,本研究设计出桥梁载体策略,将目标基因的启动子或者功能片段构建在高拷贝的桥梁载体,获得融合表达元件,通过亚克隆的方式将融合元件转入骨架载体上,获得用于转录表达和蛋白表达分析的载体。为了验证该策略的可行性,选取hrpG、hrpX和hrcC基因构建了相应的启动子探针载体和蛋白表达载体,将这些载体导入毒性调控子基因trh、lrpX和zur的突变体中,GUS活性测定、荧光定量PCR以及蛋白免疫杂交结果显示:在trh、lrpX和zur的突变体中,hrpG、hrpX和hrcC的转录表达水平、mRNA水平和蛋白表达水平呈现一致。这表明这套桥梁载体策略能够有效应用于T3SS基因转录表达和蛋白表达的分析。综上所述,运用桥梁载体能够克服低拷贝载体DNA遗传操作效率低的缺陷,这一策略也适用于毒性相关基因调控机理的研究,这将为Xoc-水稻互作研究提供高效的工作系统。