Cry1Ac的绿色荧光蛋白GFP标记及其在棉铃虫幼虫中肠的定位分布

编号 zgly0001322336

文献类型 期刊论文

文献题名 Cry1Ac的绿色荧光蛋白GFP标记及其在棉铃虫幼虫中肠的定位分布

作者 史艳霞  张永军  王桂荣  梁革梅  高继国  吴孔明 

作者单位 中国农业科学院植物保护研究所 植物病虫害生物学国家重点实验室  中国农业科学院植物保护研究所  植物病虫害生物学国家重点实验室  东北农业大学生命科学院  北京100094东北农业大学生命科学院  哈尔滨150030  北京100094 

母体文献 植物保护学报 

年卷期 2007年05期

年份 2007 

分类号 S435.622 

关键词 Cry1Ac毒蛋白  绿色荧光蛋白GFP  重叠PCR  定位分布 

文摘内容 为了明确Cry1Ac蛋白在棉铃虫体内与中肠组织的相互作用,采用重叠PCR方法将Bt-cry1Ac基因和绿色荧光蛋白GFP基因融合,构建含Cry1Ac毒蛋白和绿色荧光蛋白GFP原核表达载体,并在大肠杆菌大量表达。利用荧光显微镜观察发现,表达Cry1Ac-GFP融合蛋白的大肠杆菌在蓝光激发下发出绿色荧光。将含有融合蛋白的菌液拌入人工饲料饲喂3龄棉铃虫幼虫96h,取棉铃虫幼虫中肠做冰冻切片并在荧光显微镜下观察。结果显示,取食含有Cry1Ac-GFP融合蛋白饲料的棉铃虫幼虫中肠能够发出强烈荧光。比较Cry1Ac杀虫蛋白敏感和抗性棉铃虫幼虫中肠的发光部位,敏感棉铃虫幼虫的中肠围食膜已经消失,肠壁细胞发出强烈的荧光,而抗性棉铃虫的围食膜较健全并发出荧光。