绵毛优若藜冷诱导SSH文库构建研究

编号 zgly0000717691

文献类型 期刊论文

文献题名 绵毛优若藜冷诱导SSH文库构建研究

学科分类 220.1520;林木遗传学

作者 张党权  明付焕  江平  樊绍刚  杨自辉  邓顺阳 

作者单位 中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室  兰州大学土木工程与力学学院 

母体文献 中南林业科技大学学报: 自然科学版 

年卷期 2010(2)

页码 65-69

年份 2010 

分类号 S332.5 Q756 

关键词 绵毛优若藜  抑制消减杂交文库  冷胁迫  抗冻基因  cDNA克隆 

文摘内容 绵毛优若藜是我国近年成功引种的高抗逆性饲用及防风固沙植物。以常温下的绵毛优若藜叶片和嫩枝为对照组, 冷胁迫诱导处理后的叶片和嫩枝为试验组, 获得两者高质量mRNA后反转录成cDNA, RsaI消化使其平末端化, 试验组cDNA的5’末端连接上2个特异接头, 然后分别与过量对照组cDNA进行杂交, 把两份杂交样品混合后, 与过量的新鲜变性的对照组cDNA过夜杂交, 杂交后的混合液稀释后进行第一轮抑制性PCR以选择扩增特异表达的cDNA, 然后以第一轮PCR产物为模板用巢式引物进行二次抑制性PCR, 获得的富集差异表达cDNA即为绵毛优若藜冷胁迫SSH文库。将SSH文库的cDNA插入到载体中, 共获得了362个克隆, 为后续绵毛优若藜的抗冻基因克隆与转基因应用奠定了基础。