小反刍兽疫病毒M基因截短表达及鉴定

编号 zgly0001423586

文献类型 期刊论文

文献题名 小反刍兽疫病毒M基因截短表达及鉴定

作者 黄华欣  李刚  王勇  金红岩  陶春爱  程朝飞  隋修锟 

作者单位 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所  动物营养学国家重点实验室 

母体文献 中国动物检疫 

年卷期 2012年10期

年份 2012 

分类号 S852.659.5 

关键词 小反刍兽疫病毒  M基因  截短  表达 

文摘内容 目的将小反刍兽疫病毒M蛋白基因截短表达后用于特异性单抗制备及临床抗体水平检测。方法:用在线分析软件BepiPred分析小反刍兽疫病毒M蛋白潜在的B细胞线性表位,以本实验室构建的pCR2.1T-PPRV M质粒为模板,扩增三段截短的M基因,纯化后的PCR产物分别与克隆载体pCR2.1T连接,筛选出的阳性重组质粒经双酶切后,分别与表达载体pET-32a(+)及pGEX-6p-1连接,再将鉴定为阳性的重组质粒转化入E.coli BL21(DE3)菌株诱导表达,并用SDS-PAGE及Western blot验证。结果 PCR产物电泳,得到与预期大小相符的特异性片段。对连接克隆载体及表达载体的重组质粒双酶切后,均出现与预期一致的片段,DNA测序表明,插入片段序列与小反刍兽疫Nigeria75/1株M蛋白基因完全一致。重组蛋白经SDS-PAGE及Western blot鉴定,证明所构建的重组蛋白均获得高效表达,并均具有良好的反应原性。结论成功表达了小反刍兽疫截短M基因的蛋白,为制备特异性单抗及小反刍兽疫抗体检测奠定了一定基础。