一种新型DNA标记技术——限制性位点扩增多态性(RSAP)的建立与优化

编号 zgly0000480706

文献类型 期刊论文

文献题名 一种新型DNA标记技术——限制性位点扩增多态性(RSAP)的建立与优化

作者 杜晓华  王得元  巩振辉 

作者单位 西北农林科技大学园艺学院  广东省农业科学院蔬菜研究所广东省果蔬新技术研究重点实验室 

母体文献 西北农林科技大学学报 

年卷期 2006,34(9)

页码 45-49,54

年份 2006 

分类号 S603.2 

关键词 限制性位点扩增多态性  DNA标记技术  蔬菜育种 

文摘内容 了避开基于限制性酶切位点分子标记技术的DNA酶切环节, 简化其复杂的程序, 试验以辣椒为材料, 建立了一种新型DNA标记技术——限制性位点扩增多态性(RSAP), 并对其反应体系进行了优化, 对RSAP适用性、重复性进行了检验。结果显示, RSAP技术的引物为2条长度均为18bp的引物, 引物的3’端为4～6个碱基的限制性酶切位点序列, 接着是12～14个碱基的随机序列, 2条引物的限制性位点和随机序列不同; PCR扩增的前5个循环采用35C的退火温度, 随后的35个循环采用48℃的退火温度; 在25μL反应体系中, 模板DNA用量为20ng, Mg^2+浓度为2.5mmol/L, dNTPs浓度为0.2mmol/L, TaqDNA聚合酶用量为1.5U, 2条引物浓度均为600nmol/L;RSAP技术重复性好, 适用性广泛, 是一种操作简便、产率中等、稳定可靠的DNA标记技术。