桦褐孔菌膜二肽酶在巴斯德毕赤酵母中的分泌表达

编号 zgly0001669777

文献类型 期刊论文

文献题名 桦褐孔菌膜二肽酶在巴斯德毕赤酵母中的分泌表达

作者 黄金金  王艳  胡萍  袁雯雯  赵艳霞  郑维发 

作者单位 江苏师范大学药用植物生物技术实验室 

母体文献 菌物学报 

年卷期 2019年05期

年份 2019 

分类号 Q78  S567.3 

关键词 桦褐孔菌  二肽酶  巴斯德毕赤酵母表达体系  异源表达 

文摘内容 本研究利用巴斯德毕赤酵母Pichia pastoris蛋白表达体系表达了药用担子菌桦褐孔菌的一个二肽酶基因。该二肽酶基因编码区全长1814bp,包含6个内含子,编码465个氨基酸。生物信息学分析发现,二肽酶基因编码的蛋白中不含信号肽序列,但在第55–77位氨基酸之间存在一个跨膜结构。将含跨膜结构和去跨膜结构蛋白的cDNA序列分别克隆到酵母分泌型表达载体pPICZαA上,电转化至巴斯德毕赤酵母X-33中,用1%(V/V)甲醇诱导重组菌株表达目标蛋白,采用SDS-PAGE和Western-blot检测表达蛋白。结果显示,巴斯德毕赤酵母可表达含跨膜结构的完整基因,但目标蛋白不能分泌到胞外,存在于破碎细胞的沉淀中,且没有催化活性;而去跨膜结构的蛋白则可分泌表达到胞外,并具有催化活性。Ni-NTA纯化去跨膜结构的桦褐孔菌二肽酶浓度可达0.12mg/mL,并发现其在pH 7.3、反应温度50℃、反应时间2h的条件下,以Gly-Gly为底物时,其比活为433U/mg。同时检测到其对Ile-Leu、Trp-Trp和Phe-Phe具有较高的水解活性。