梨小食心虫谷胱甘肽S-转移酶GmolGST6的基因克隆、原核表达和酶学特征

编号 zgly0001639033

文献类型 期刊论文

文献题名 梨小食心虫谷胱甘肽S-转移酶GmolGST6的基因克隆、原核表达和酶学特征

作者 李帅  苏丽  李伯辽  李怡萍  李广伟  仵均祥 

作者单位 西北农林科技大学旱区作物逆境生物学国家重点实验室  广西大学农学院  延安大学生命科学学院 

母体文献 昆虫学报 

年卷期 2018年04期

年份 2018 

分类号 Q78  S433.4 

关键词 梨小食心虫  谷胱甘肽S-转移酶  嗅觉  表达分析  酶活力 

文摘内容 【目的】克隆一种梨小食心虫Grapholita molesta触角中谷胱甘肽S-转移酶（glutathione Stransferase,GST）基因并分析其结构特征,明确其表达特点及该基因编码蛋白的酶学特征,以期为该基因的功能研究提供理论依据。【方法】根据梨小食心虫雌虫触角转录组数据,利用RT-PCR克隆梨小食心虫GST基因;通过实时荧光定量PCR测定该基因在成虫触角、头（去触角）、胸、腹、足和翅中的转录水平;利用原核表达系统和Ni离子亲和层析技术表达和纯化梨小食心虫GST重组蛋白,并对重组蛋白的稳定性和酶促动力学参数进行分析。【结果】获得了梨小食心虫谷胱甘肽S-转移酶基因GmolGST6（GenBank登录号:MF503496）的完整编码序列,开放阅读框为645 bp,编码214个氨基酸,分子量为24.21 kD,理论等电点为5.10;进化树分析和三维结构模拟表明GmolGST6属于Delta亚家族。qPCR测定结果表明,GmolGST6基因在雌雄成虫触角中高丰度表达,且在雄虫触角中的表达量显著高于雌虫。重组蛋白GmolGST6具有催化通用底物CDNB的活性,并且在pH7.5,40℃时具有最高的酶活力。重组蛋白GmolGST6的米氏常数Km为0.21±0.06 mmol/L,最大反应速度Vmax为14.02±1.40μmol/min·mg。【结论】根据GmolGST6的表达特点及其重组酶对模式底物CDNB的催化活性,推测在触角中高丰度表达的GmolGST6具有参与降解外源物质、保护嗅觉系统免受外源性物质毒害的功能。