生存素反义脱氧寡核苷酸治疗喉癌的体内外实验

编号 zgly0000447158

文献类型 期刊论文

文献题名 生存素反义脱氧寡核苷酸治疗喉癌的体内外实验

作者 项丞  刘伟松  贾深汕 

作者单位 哈尔滨医科大学附属肿瘤医院头颈外科 

母体文献 中华耳鼻咽喉头颈外科杂志 

年卷期 2006,41(1)

页码 60-64

年份 2006 

分类号 R733.7  R329.28 

关键词 喉肿瘤  寡核苷酸  反义  基因疗法  动物  实验 

文摘内容 目的观察生存素反义脱氧寡核苷酸(antisense oligodeoxynuclecotide, ASODN)诱导人喉癌细胞系Hep2凋亡的作用及对喉癌动物模型抑瘤率的影响, 以探讨反义技术选择性封闭目的基因表达进而实现抗肿瘤的作用, 为喉癌的基因治疗提供新思路。方法用脂质体Lipofectamine^TM 2000将反义寡核苷酸生存素片段导人人喉癌细胞系Hep2, 通过测定细胞增殖的四甲基偶氮唑蓝[3-(4, 5-dimethylthiazol-2-y1)-2, 5-diphenyltetrazolium bromide, TMM]法检测转染后72h内的细胞生长情况; 转染48h后逆转录聚合酶链反应(reverse transcription—polymerase chain reaction, RT—PCR)检测生存素基因表达, WesternBlot检测蛋白表达; 同时细胞凋亡原位检测(terminal deoxynucleotide mediated nick end labeling, TUNEL)法和流式细胞仪检测细胞凋亡情况。Hep2细胞接种于32只裸鼠, 分组给予Lipo—ASODN进行治疗, 2周后评价其抑瘤率。结果MTT实验显示Lipo—ASODN组浓度为1.0μmol/L和2.0μmol/L时细胞生长曲线逐渐降低, 72h细胞抑制率可达52.5%和71.4%, 两组间差异具有统计学意义(P=0.046), 均显著高于对照组(P值分别为0.003和0.0004); 转染48h后Lipo—ASODN组RT—PCR结果均可见生存素基因表达量明显少于对照组, Western Blot见生存素蛋白表达呈下降趋势; Lipo—ASODN组TUNEL检测可见细胞核内出现凋亡特征性阳性染色, 流式细胞仪检测可见明显凋亡峰, 而对照组无此现象。动物实验Lipo—ASODN组肿瘤抑制率可达48.1%和61.3%, 显著高于对照组(P值分别为0.004和0.0006), 且两组间差异具有统计学意义(P=0.032), 呈一定的剂量依赖性。结论生存素反义寡核苷酸具有诱导喉癌细胞凋亡和体内抗肿瘤的作用, 提示反义核酸技术可作为一种治疗手段应用于喉癌的基因治疗。