快速筛选拟南芥受精和早期胚胎发生相关基因的方法

编号 zgly0001497244

文献类型 期刊论文

文献题名 快速筛选拟南芥受精和早期胚胎发生相关基因的方法

作者 黄洁  李鑫波  严海龙  陈丹  孙蒙祥  彭雄波 

作者单位 武汉大学生命科学学院杂交水稻国家重点实验室 

母体文献 植物科学学报 

年卷期 2015年04期

年份 2015 

分类号 Q943.2 

关键词 拟南芥  T-DNA  受精  早期胚胎发生  突变体筛选 

文摘内容 阐明拟南芥受精和早期胚胎发生过程对理解被子植物生殖发育有着重要的指导意义,而利用正向遗传学方法研究拟南芥突变体的表型及其分子机理是探究植物基因功能最常用的一种方法。基于常规的插入突变(包括T-DNA和转座子)、化学诱变(如ethylmethane sulfonate,EMS)和高能射线方法构建的突变体库中假阳性突变体多,难以高效筛选到受精和早期胚胎发生相关基因的突变体。为解决这一难题,本研究建立了一种构建T-DNA插入突变体文库的新方法。即在载体p CAMBIA1302的T-DNA元件上增加花粉特异荧光标记基因(p LAT52∷EGFP),并遗传转化具有四分体花粉的Columbia野生型拟南芥突变体qrt1-2;对获得的突变体库可利用花粉荧光快速排除假阳性突变体,并采用反向PCR(inverse-PCR)扩增技术确定突变位点。此方法在筛选拟南芥受精和早期胚胎发生相关基因突变体上的成功应用表明,其是一种效率高、针对性强、操作相对快捷方便的拟南芥突变体筛选方法。