雷公藤悬浮细胞原生质体的制备及瞬时转化体系的建立

编号 zgly0001567920

文献类型 期刊论文

文献题名 雷公藤悬浮细胞原生质体的制备及瞬时转化体系的建立

作者 胡添源  王睿  陈上  马宝伟  高伟  黄璐琦 

作者单位 首都医科大学中医药学院  中医络病研究北京市重点实验室  中国中医科学院中药资源中心道地药材国家重点实验室培育基地 

母体文献 植物学报 

年卷期 2017年06期

年份 2017 

分类号 S567.19 

关键词 原生质体  悬浮细胞  瞬时转化  雷公藤 

文摘内容 为探索药用植物雷公藤(Tripterygium wilfordii)悬浮细胞原生质体提取的最优条件,并建立雷公藤原生质体瞬时转化体系,以雷公藤悬浮细胞为材料,对酶解液配比、酶解时间、甘露醇浓度及处理转速进行考察。用PEG介导的瞬时转化法将外源基因转化到雷公藤原生质体中。结果表明,以雷公藤悬浮细胞为材料提取原生质体的最佳条件是酶液配比为2.0%纤维素酶+0.5%果胶酶+0.5%离析酶,甘露醇浓度为0.6 mol·L–1,酶解10小时,处理转速为67×g;用PEG介导法将含有编码GFP的植物表达载体转化雷公藤悬浮细胞原生质体,激光共聚焦扫描显微镜下细胞显示绿色荧光。通过实验筛选得到雷公藤悬浮细胞原生质体的最佳提取条件,建立了雷公藤悬浮细胞原生质体的瞬时转化体系,为进一步开展雷公藤功能基因及合成生物学研究奠定了基础。