小鼠SOCS3基因真核表达载体的构建及其对3T3-L1细胞凋亡的影响

编号 zgly0001411746

文献类型 期刊论文

文献题名 小鼠SOCS3基因真核表达载体的构建及其对3T3-L1细胞凋亡的影响

作者 安磊  孙婵  解芸菲  王勇  吕彬  孙超 

作者单位 西北农林科技大学动物医学院  西北农林科技大学动物科技学院 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2011年09期

年份 2011 

分类号 Q786 

关键词 细胞凋亡  SOCS3  pEGFP-N1 

文摘内容 【目的】探讨SOCS3对3T3-L1细胞凋亡的影响。【方法】以小鼠脂肪组织提取的RNA为模板,用RT-PCR扩增SOCS3基因,将其克隆至pMD18-T Simple,构建pMD18-T-SOCS3重组质粒,经测序验证后,以pMD18-T-SOCS3为模板扩增SOCS3基因,将其克隆至pEGFP-N1,构建真核重组质粒pEGFP-N1-SOCS3,测序正确后,将重组质粒pEGFP-N1-SOCS3转染3T3-L1细胞,荧光下观察GFP的表达,RT-PCR和Western blotting检测细胞内SOCS3mRNA和蛋白的表达,观察细胞凋亡的变化。【结果】测序表明,pMD18-T-SOCS3和pEGFP-N1-SOCS3的核苷酸序列正确率为100%;在荧光显微镜下发现,脂质体组和SOCS3组均有GFP的表达;RT-PCR和Westernblotting检测表明,3T3-L1细胞中SOCS3mRNA表达显著提高(P<0.05);Hoechst 33258染色发现,SOCS3组的细胞凋亡显著;Bax和c-myc基因的mRNA表达水平显著升高(P<0.05),bcl-2和mcl-1基因表达水平显著降低(P<0.05)。【结论】SOCS3对脂肪细胞凋亡的发生有促进作用。