猪弓形虫实时荧光PCR检测方法的建立与应用

编号 zgly0001705851

文献类型 期刊论文

文献题名 猪弓形虫实时荧光PCR检测方法的建立与应用

作者 袁淑萍  谢彩华  王东方  班付国  闫若潜 

作者单位 河南省动物疫病预防控制中心 

母体文献 中国动物检疫 

年卷期 2020年05期

年份 2020 

分类号 S858.28 

关键词 弓形虫病  实时荧光定量PCR  猪  诊断 

文摘内容 为建立一种快速、敏感、特异的猪弓形虫检测方法,根据弓形虫保守基因序列,设计一套特异性引物和FAM荧光素标记的MGB探针;通过对PCR反应体系和反应条件进行优化筛选,建立了猪弓形虫实时荧光定量PCR检测方法,并对此PCR检测方法进行了特异性、敏感性、重复性试验;利用所建立的方法对60份疑似弓形虫感染的临床样品进行了检测。结果显示:建立的猪弓形虫实时荧光定量PCR检测方法在101～107拷贝/μL模板范围内有很好的线性关系;对弓形虫重组阳性质粒出现阳性扩增信号,但对阴性对照的水和其他7种病原对照未扩增出特异性曲线;最低检测模板浓度为10拷贝/μL;自60份疑似猪弓形虫感染样品中检出32份阳性,并且和克隆测序结果一致。结果表明,本研究建立的猪弓形虫实时荧光定量PCR检测方法可用于猪弓形虫的快速检测,从而为猪弓形虫病的诊断提供了特异、敏感、高通量的方法。