紫杉醇合成途径中紫杉烯合成酶cDNA的克隆

编号 zgly0000452896

文献类型 期刊论文

文献题名 紫杉醇合成途径中紫杉烯合成酶cDNA的克隆

作者 肖颖  赵冬  王刚 

作者单位 河北师范大学生命科学学院  石家庄学院化学系 

母体文献 中国农业科学 

年卷期 2006,39(10)

页码 2138-2146

年份 2006 

分类号 S567.190.3 

关键词 南方红豆杉  紫杉醇  紫杉烯合成酶  cDNA克隆 

文摘内容 【目的】研究紫杉烯合成酶超表达对紫杉醇代谢的影响, 以提高红豆杉属植物细胞中紫杉醇的含量。【方法】从南方红豆杉(Taxusc chinensis var.mairei)愈伤组织提取总RNA, 根据已发表的中国红豆杉紫杉烯合成酶cDNA序列设计两对引物, 通过RT-FCR技术扩增出该酶5’端长度为1201bp和3＇端长度为1388bp的两个cDNA片段, 将其克隆到pGEM—TVector上并转化到E.coli DH5α中, 5’端片段经Xba Ⅰ和Bgl Ⅱ双酶切鉴定, 3＇端片段经Bgl Ⅱ和SacⅠ双酶切鉴定后, 对阳性克隆进行序列测定。两片段与双元载体pCAMBIA1300-35S: : GUS以T4 DNA连接酶连接并转化到E.coli DH5α中, 经XbaⅠ和SacⅠ双酶切鉴定。【结果】测序结果证实确为紫杉烯合成酶基因, 酶切结果证实紫杉烯合成酶cDNA全长连接成功并插入到pCAMBIA130035S: : GUS中。【结论】两cDNA片段拼接得到全长2589bp的紫杉烯合成酶基因, 编码862个氨基酸, 与中国红豆杉紫杉烯合成酶基因具有98%的同源性; 成功构建了pCAMBIA130035S—TS载体, 为下一步的转基因工作做好了准备。