柑橘木虱酵母双杂交cDNA文库的构建及评价

编号 zgly0001459715

文献类型 期刊论文

文献题名 柑橘木虱酵母双杂交cDNA文库的构建及评价

作者 马晓芳  陈国庆  张学潮  徐海君 

作者单位 浙江大学昆虫科学研究所  浙江省柑桔研究所 

母体文献 昆虫学报 

年卷期 2013年03期

年份 2013 

分类号 S436.66 

关键词 柑橘木虱  柑橘  黄龙病  酵母双杂交cDNA文库  膜蛋白  蛋白质互作 

文摘内容 为了探索研究柑橘木虱Diaphorina citri与柑橘黄龙病(Huanglongbing,HLB)病原菌的相互作用蛋白,本研究运用RNA转录中5’末端转换机制(Switching Mechanism at 5’End of the RNA Transcript,SMART)技术构建了柑橘木虱的酵母双杂交cDNA文库。以实验室饲养的柑橘木虱为材料,提取总RNA,经反转录后合成ds cDNA,两端添加同源重组序列,并用层析柱纯化;ds cDNA与文库质粒pGADT7-Rec在酵母Y187感受态细胞内发生同源重组,柑橘木虱cDNA重组到文库质粒上,完成酵母双杂交cDNA文库的构建。结果表明,文库容量达到106,扩增文库滴度为2.23×107cfu/mL,cDNA插入片段的平均长度大于750bp,达到试剂盒建库要求。另外,我们利用构建的酵母双杂交文库,以HLB病原菌Candidatus Liberibacter asiaticus(CLas)的两个膜蛋白ORF420和ORF3420作为诱饵进行筛选试验,但是并没有得到阳性克隆。柑橘木虱酵母cDNA文库的构建为开展柑橘木虱与柑橘黄龙病病原菌互作机制的研究奠定了基础。