冷冻原肠中细菌基因组DNA提取方法的建立

编号 zgly0001705858

文献类型 期刊论文

文献题名 冷冻原肠中细菌基因组DNA提取方法的建立

作者 宋鸿雁  仇保丰  高雪梅  刘春  刘文斌  朱顺星  邵义祥 

作者单位 南通大学实验动物中心  南通海关 

母体文献 中国动物检疫 

年卷期 2020年02期

年份 2020 

分类号 S852.61 

关键词 冷冻原肠  细菌  细菌基因组DNA  提取方法 

文摘内容 为建立冷冻原肠中细菌基因组DNA的直接提取法,采用震荡洗脱、金属网过滤和梯度离心相结合的方法,对2份冷冻原肠样品进行前处理;对经前处理后的原肠样品,采用酚/氯仿法提取细菌基因组DNA,然后进行琼脂糖电泳和OD260/OD280比值测定;以细菌基因组DNA为模板,用PCR技术扩增细菌16S rDNA并构建克隆文库,并从2个文库中各随机挑取3个菌落进行16S rDNA的PCR鉴定和DNA测序。结果显示:样品提取的DNA浓度、纯度较高,OD260/OD280比值介于1.8～2.0;挑取的6个菌落中,1个为阴性,剩余5个为阳性,为肠球菌属（Enterococcus）和魏斯氏菌属（Weissella）的5种细菌。结果表明,本研究提取的原肠细菌基因组DNA质量较好,可用于非培养法研究冷冻原肠中细菌的多样性。本研究解决了因缺乏原肠细菌基因组DNA提取方法,无法进一步应用现代分子生物学方法研究冷冻原肠细菌的多样性、菌群组成结构和动态变化等难题。