蚕微卫星DNA体外自我扩增条件初步研究

编号 zgly0001265927

文献类型 期刊论文

文献题名 蚕微卫星DNA体外自我扩增条件初步研究

作者 李关荣  廖芳  鲁成  向仲怀 

作者单位 西南农业大学农学与生命科学学院  西南农业大学蚕学与生物技术学院  西南农业大学农学与生命科学学院 重庆400716西南农业大学蚕学与生物技术学院  重庆400716  重庆400716 

母体文献 蚕业科学 

年卷期 2003年03期

年份 2003 

分类号 Q75 

关键词 蚕  微卫星DNA  基因组自我引发PCR 

文摘内容 采用一种类似PCR的基因组自我引发PCR(GSP PRC)法 ,初步研究了家蚕、野桑蚕、天蚕、蓖麻蚕和柞蚕的微卫星DNA的体外基因组自我引发PCR扩增条件。质量浓度为 10 0mg/L的基因组DNA经 10 0℃变性 15min后 ,与等量相同浓度未变性的DNA混合作为模板 ,在 80 μL扩增体系 [含 0 2mmol/LdNTPs、5 0mmol/LKCl、10mmol/LTris HCl(pH 9 0 )、4mmol/LMgCl2 、1 2 5UTaqpolymerase]中加入 1μL此混合模板 ,在92℃、1min→ 5 5℃、2min→72℃、2min ,30～ 90次累积循环的扩增条件下 ,成功地得到了PCR产物。反应体系中 ,基因组DNA的适宜质量浓度为 1 2 5mg/L。GSP PCR产物经琼脂糖凝胶电泳后的部分片段回收后 ,在同样条件下 ,30～ 6 0个循环可得到同样大小范围的产物。GSP PCR产物经 6 %的变性测序胶电泳 ,得到典型的梯状带 ,表明为微卫星DNA。