应用PCR技术快速检测熊蜂短膜虫

编号 zgly0001515597

文献类型 期刊论文

文献题名 应用PCR技术快速检测熊蜂短膜虫

作者 张体银  刘蓓  郑腾  白泉阳  田国宁  王武军  张志灯  于师宇 

作者单位 福建出入境检验检疫局福建省检验检疫技术研究重点实验室  福建农林大学蜂学学院  潍坊出入境检验检疫局 

母体文献 昆虫学报 

年卷期 2016年06期

年份 2016 

分类号 S895.3 

关键词 熊蜂短膜虫  PCR技术  内转录间隔区  熊蜂  检疫 

文摘内容 【目的】近年来,熊蜂作为温室作物的理想授粉者在国外已被广泛利用,并且获得很好的经济效益和生态效益,所以国外熊蜂经常被进口用于设施农业。熊蜂短膜虫Crithidia bombi是熊蜂的一种重要寄生虫病,一旦随进口熊蜂传入,将给国内熊蜂蜂群带来严重危害,因此迫切需要建立一种熊蜂短膜虫检测方法。【方法】基于熊蜂短膜虫基因内转录间隔区(internal transcribed space,ITS)基因序列设计了一对引物(Cri-F/R),建立了熊蜂短膜虫的PCR检测方法,并对退火温度、引物浓度和循环个数等反应条件进行了优化,同时验证了该PCR方法的灵敏性、特异性和稳定性。【结果】以熊蜂短膜虫ITS基因保守区设计特异性引物建立的熊蜂短膜虫PCR检测方法是可行的。优化的PCR反应条件为:退火温度59℃,引物浓度0.5μmol/L,扩增循环数35次。对感染熊蜂短膜虫的熊蜂总DNA的灵敏度达到13.24×10-5ng/μL,并具有良好的特异性和稳定性。将该方法应用于熊蜂短膜虫的检测,整个检测过程不超过4 h,具有良好的适用性。【结论】研究建立了熊蜂短膜虫检测方法,能用于疫情监测和进境熊蜂的检验检疫。