一种用于观测草坪草叶脉网络结构的装片制备方法

申请号 CN202010815771.1

专利名称 一种用于观测草坪草叶脉网络结构的装片制备方法

专利类型 发明 

年份 2020 

公开号 CN112014178A

公开日 2020.12.01

主分类号 G01N1/28

分类号 G01N1/28  G01N1/30  G01N21/84 

申请日 2020.08.14

申请人 天津农学院 

国家省市 天津 

联系地址 300384 天津市西青区津静公路22号

发明人 孙小玲  宋重升  柴旭旭  宋午椰  崔朝伟 

代理人 刘丹舟

代理机构 天津盛理知识产权代理有限公司 12209

内容摘要 本发明涉及一种用于观测草坪草叶脉网络结构的装片制备方法，包括：⑴叶片采集与预处理；⑵脱色：用5％的NaOH将叶片浸泡2～3天；⑶叶脉染色及分色：根据草坪草的种类选用两种方式对叶脉进行清晰化处理：a番红染色及分色脱水；b番红-固绿染色及分色脱水；⑷“复水”：将叶片用水浸泡2～24h(a)或20～48h(b)后即可观看并拍摄图像，最后用软件分析各级叶脉密度及所占百分比。本发明从叶片的前期处理、染色、分色、脱水等多个步骤进行改进，提出了一种操作简便、安全环保、制备周期短、制片效果好、图像清晰的用于观测草坪草叶脉网络结构的装片制备方法。对草坪草具普遍适应性，可以较快速的获得较清晰的叶脉图像，用于草坪草叶脉网络结构的相关研究。

主权利要求 1.一种用于观测草坪草叶脉网络结构的装片制备方法，其特征在于：具体包括以下方法步骤：⑴叶片采集与预处理选取待处理的草坪草叶片，先在蒸馏水中浸泡10min，取出叶片，在滤纸上静置10～20s，去除叶片表面的水分和杂质，用透明胶带粘去叶片中部正反面绒毛，处理长度为6～8cm，再将指甲油均匀涂抹于叶片正反面，待其晾干后，用透明胶带将指甲油除去，从处理部位剪取4～6cm长的叶片；⑵脱色处理将处理后的草叶片浸泡于5％的NaOH溶液中，浸泡时间为2～3天，中间换一次浸泡液；⑶叶脉染色及分色根据草坪草叶片的种类选用两种方式对叶脉进行清晰化处理：a番红染色及分色脱水：取叶片，将其直接置于1％的番红染料中染色1～3min后，再用蒸馏水将叶片冲洗干净，将叶片依次在30％、50％、70％、80％、95％的乙醇溶液中浸泡5～6min；b番红-固绿染色及分色脱水：取叶片，将其置于1％的番红染料中染色10min后，用蒸馏水将叶片冲洗干净，再将叶片依次在30％、50％、70％、80％、95％的乙醇溶液中浸泡5～6min，从95％的乙醇中取出叶片后，直接置于2％的固绿染液中染色2～3min，然后再依次用95％的乙醇、无水乙醇、无水乙醇/二甲苯混合溶液和100％二甲苯溶液浸泡，其中95％的乙醇和无水乙醇的处理时间为4～5min，无水乙醇/二甲苯混合溶液和100％二甲苯溶液的处理时间为5～6min；⑷“复水”观察并拍摄采用方式a染色的草坪草叶片复水2～24h以后观察；采用方式b染色的草坪草叶片在蒸馏水中浸泡20～48h后观察叶脉结构，中间换一次水，观察叶脉时，用5ml塑料滴管滴一滴蒸馏水/去离子水置于有叶片的载玻片上，盖上盖玻片，放置于与电脑相连的显微镜下观察，并拍摄不同部位的叶脉图片；⑸拍摄观察完的叶片材料用载玻片和盖玻片封存，用保鲜膜包裹后常温或低温保存。

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