利用CRISPR/Cas9基因编辑载体获得再生效率高的草莓新种质的方法及应用

申请号 CN202111297086.5

专利名称 利用CRISPR/Cas9基因编辑载体获得再生效率高的草莓新种质的方法及应用

专利类型 发明 

年份 2022 

公开号 CN114164229A

公开日 2022.03.11

主分类号 C12N15/84

分类号 A01H6/74  A01H5/00  C12N15/84 

申请日 2021.11.04

申请人 南京农业大学 

国家省市 江苏 

联系地址 210000 江苏省南京市玄武区卫岗1号

发明人 顾婷婷  菅宝霞  李宪杨  吴旭婷  刘德才  丁静 

代理人 王玉

代理机构 南京纵横知识产权代理有限公司 32224

优先权 CN202111297086(A) 20211104

内容摘要 本发明涉及一种利用FvePILS5基因的CRISPR/Cas9基因编辑载体获得再生效率高的草莓新种质的方法及应用，包括：根据草莓FvePILS5的DNA序列，设计并合成包含目的基因靶点的sgRNA序列；用Bsa I酶将合成的包含目的基因靶点的sgRNA序列连接到pYLCRISPR/Cas9Pubi?H载体；并利用农杆菌转化森林草莓叶片外植体，测序验证再生植株突变序列，得到愈伤形成和离体芽再生频率较高的pils5?1森林草莓突变体种质。本发明通过构建CRISPR/Cas9基因编辑载体，并用农杆菌转化法，获得了再生效率较高的pils5?1突变体，创造了新种质，为草莓再生苗的获得提供了一种高效的方法。

主权利要求 1.一种CRISPR/Cas9基因编辑载体的制备方法，其特征在于，包括：根据草莓FvePILS5的DNA序列，设计并合成包含目的基因靶点的sgRNA序列，所述sgRNA序列如SEQ ID NO.3所示，所述靶点序列如SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示；设计并合成sgRNA上下游引物，上游引物序列如SEQ ID NO.6所示，下游引物序列如SEQID NO.7所示；用Bsa I酶将合成的包含目的基因靶点的sgRNA序列连接到pYLCRISPR/Cas9Pubi-H载体，并利用sgRNA上下游引物进行PCR反应，通过测序判断sgRNA序列是否整合到pYLCRISPR/Cas9Pubi-H载体上。

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