一种转基因水稻杂草化基因漂移风险的评估方法及应用

申请号 CN202010050883.2

专利名称 一种转基因水稻杂草化基因漂移风险的评估方法及应用

专利类型 发明 

年份 2020 

公开号 CN111139311A

公开日 2020.05.12

主分类号 C12Q1/6895

分类号 C12Q1/6895  A01H1/02  A01G22/22 

申请日 2020.01.17

申请人 南京农业大学 

国家省市 江苏 

联系地址 210095 江苏省南京市玄武区卫岗1号

发明人 强胜  宋小玲  戴伟民  张晶旭  王敏  李雷 

代理人 曹翠珍

代理机构 南京经纬专利商标代理有限公司 32200

内容摘要 本发明公开了一种转基因水稻杂草化基因漂移风险的评估方法及应用，该方法包括以下步骤：通过隔行种植或包围种植的方式混种，分别收获转基因水稻与杂草稻的后代种子，正向漂移检测和筛选幼苗抗性，存活植株再检测抗性基因；反向漂移检测子实中红皮Rc基因。根据抗性基因和Rc基因的检出率，合并计算转基因水稻基因漂移率，评价基因漂移风险。该方法克服了以往仅考虑正向漂移风险忽视反向漂移风险而低估实际漂移风险的弊端，从而可以更准确评估转基因水稻通过花粉介导的基因漂移风险大小，为转基因水稻商业化过程中的环境安全评价和管理提供技术支撑。

主权利要求 1.一种转基因水稻杂草化基因漂移风险的评估方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：通过分期将转基因水稻与杂草稻分别作为花粉供体和受体通过隔行种植或包围种植的方式混种；当采用隔行种植时，分别收集转基因水稻后代种子与杂草稻后代种子；当采用包围种植时，只需收集作为花粉受体的后代种子；S2：收集种子后，采用分步抽样法抽取所需种子用于基因漂移检测，具体如下：S21：采用随机抽样的方法，从收获的种子中抽取20000粒种子；S22：若得到的基因漂移率大于0.2％，则不必继续增加抽样量；若得到的基因漂移率小于0.2％，则需再检测10000粒种子；在此基础上，若得到的基因漂移率大于0.05％，则不需要增加种子检测量；若得到的基因漂移率小于0.05％，还需再检测10000粒种子，直至得到的基因漂移率大于0.05％；S3：对转基因水稻向杂草稻基因漂移率，即正向基因漂移率进行检测，具体如下：S31：对收获的杂草稻种子打破休眠后进行发芽率检测，把装有100粒种子的培养皿放置于30℃光照培养箱培养7d，测定发芽率，试验重复4次，每种受体材料抽样方法采用S2所述的分步抽样法；S32：根据作为标记基因的抗性基因，选择对应的抗性筛选方法；将经过筛选出来的幼苗移栽在育苗盘内培养至3叶期，采取叶片，进行分子检测；S33：计算正向基因漂移率：正向基因漂移率＝(抗性种子数/检测种子总数/发芽率)×100％；S4：对杂草稻向转基因水稻基因漂移率，即反向基因漂移率进行检测，具体如下：S41：在抽取的样本中随机抽样60粒作为一组，并进行脱壳磨样；将脱壳磨样后的样品进行DNA提取；S42：将提取到的DNA进行Rc基因检测，根据是否存在104bp和118bp的扩增片段，来判断该样品中是否存在杂草稻向转基因水稻漂移形成的杂交种；若存在104bp和118bp的扩增片段，则该组水稻中存在一粒由于杂草稻花粉漂移到转基因水稻种子产生的杂交种子；S43：重复步骤S41～S42，直至样本全部检测完；并计算反向基因漂移率：反向基因漂移率＝(发生基因漂移的粒数/样本总粒数)×100％；S5：统计正向基因漂移率和反向基因漂移率，最终得出基因漂移率：基因漂移率＝(正向基因漂移率+反向基因漂移率/2)×100％。

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