一种检测百合中车前草花叶病毒的实时荧光定量PCR方法

申请号 CN202111085250.6

专利名称 一种检测百合中车前草花叶病毒的实时荧光定量PCR方法

专利类型 发明 

年份 2021 

公开号 CN113667776A

公开日 2021.11.19

主分类号 C12Q1/70

分类号 C12R1/94  C12Q1/6851  C12Q1/70 

申请日 2021.09.16

申请人 中国农业科学院蔬菜花卉研究所 

国家省市 北京 

联系地址 100081 北京市海淀区中关村南大街12号

发明人 徐雷锋  明军  杨盼盼  宋蒙 

代理人 杨伟

代理机构 成都宏田知识产权代理事务所(普通合伙) 51337

优先权 CN202111085250(A) 20210916

内容摘要 本发明提供一种检测百合中车前草花叶病毒的实时荧光定量PCR方法。包括取待测百合植株的叶片，提取总RNA；以提取的百合叶片总RNA为模板，进行逆转录反应获得cDNA；以获得的cDNA为模板，利用特异性引物对CP?2F/R进行基于荧光染料SYBRGreenI的实时荧光定量PCR检测；以不同浓度的含检测基因片段的质粒PlAMV?CP2标准品为模板制作标准曲线；根据检测结果Cq值判断植株的带病情况，根据标准曲线对带病植株的病毒进行定量计算。本发明对侵染车前草花叶病毒的百合植株的鉴定具有快速简便、灵敏度高及可重复性强的优点，其检测灵敏度是常规RT?PCR的100倍，可用于进出境口岸和百合生产中车前草花叶病毒的快速诊断、定量检测及监测防控。

主权利要求 1.一种检测百合中车前草花叶病毒的实时荧光定量PCR方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)取待测百合植株的叶片，提取总RNA；(2)以提取的百合叶片总RNA为模板，进行逆转录反应，获得cDNA；(3)以步骤(2)的cDNA为模板，利用特异性引物对CP-2F/R进行基于荧光染料SYBRGreen I的实时荧光定量PCR检测，所述特异性引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ IDNO.2所示，所述特异性引物的序列如下：CP-2F：5’-TCTTCGATGGCCTCCTCAAC-3’，CP-2R：5

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