一种植物抗病毒RNA沉默相关转录因子筛选方法及应用

申请号 CN202210063849.8

专利名称 一种植物抗病毒RNA沉默相关转录因子筛选方法及应用

专利类型 发明 

年份 2022 

公开号 CN114480486A

公开日 2022.05.13

主分类号 C12N15/84

分类号 A01H6/82  C12Q1/6869  C12N15/65  C12Q1/6895  C12N15/53  A01H5/12  C12N15/84 

申请日 2022.01.20

申请人 西北农林科技大学 

国家省市 陕西 

联系地址 712100 陕西省西安市杨凌示范区邰城路3号

发明人 孙道阳  毛雁翔 

代理人 孙雅静

代理机构 西安恒泰知识产权代理事务所 61216

优先权 CN202210063849(A) 20220120

内容摘要 本发明公开了一种植物抗病毒RNA沉默相关转录因子筛选方法及应用，以植物矮牵牛作为研究对象，采用转录组测序和VIGS相结合的技术，首先构建TRV病毒侵染的差异表达基因数据库，从中选择极显著差异表达转录因子作为候选基因；分别构建至TRV?GFP?PhPDS载体，利用双报告基因分别监测病毒积累与RNA沉默过程；接种矮牵牛后，以绿色荧光和光漂白表型作为筛选依据，在上调表达转录因子中，导致绿色荧光增强、光漂白表型受到抑制的基因认定为正调控转录因子，在下调表达转录因子中，造成绿色荧光减弱、光漂白表型受到促进的基因认定为负调控转录因子。本发明为研究植物抗病毒RNA沉默转录调控机理提供了一种简单、快速、有效的基因筛选方法。

主权利要求 1.一种植物抗病毒RNA沉默相关转录因子的筛选方法，所述植物抗病毒RNA沉默相关转录因子包括植物抗病毒RNA沉默正调控转录因子和植物抗病毒RNA沉默负调控转录因子，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：采用烟草脆裂病毒接种矮牵牛植株，接种后取样，利用转录组测序技术建立烟草脆裂病毒侵染的矮牵牛叶片差异表达基因数据库；步骤2：从所述矮牵牛叶片差异表达基因数据库中选择极显著上调表达的转录因子和极显著下调表达的转录因子，排除非抗性相关基因，剩余作为候选转录因子；步骤3：以烟草脆裂病毒为载体，绿色荧光蛋白和矮牵牛八氢番茄红素脱氢酶基因为报告基因，将步骤2中所述候选转录因子的基因片段依次构建至烟草脆裂病毒-绿色荧光蛋白-矮牵牛八氢番茄红素脱氢酶载体中，得到烟草脆裂病毒载体的重组质粒；步骤4：将烟草脆裂病毒载体的重组质粒转化进农杆菌菌株中，利用农杆菌介导法注射接种矮牵牛小苗，观察接种后矮牵牛小苗叶片绿色荧光信号强度及系统叶片光漂白表型程度；以绿色荧光和光漂白表型作为筛选依据，在上调表达的转录因子基因中，导致绿色荧光增强、光漂白表型受到抑制的基因认定为植物抗病毒RNA沉默正调控转录因子；在下调表达的转录因子基因中，导致绿色荧光减弱、光漂白表型受到促进的基因认定为抗病毒RNA沉默负调控转录因子，完成筛选。

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