一种利用功能土著菌群固体菌剂去除土壤中USEPA PAHs的方法

申请号 CN202210208068.3

专利名称 一种利用功能土著菌群固体菌剂去除土壤中USEPA PAHs的方法

专利类型 发明 

年份 2022 

公开号 CN114602967A

公开日 2022.06.10

主分类号 B09C1/10

分类号 B09C1/10 

申请日 2022.03.04

申请人 南京农业大学 

国家省市 江苏 

联系地址 210095 江苏省南京市玄武区卫岗1号

发明人 凌婉婷  王建  孙雨豪  高彦征 

代理人 胡颖

代理机构 北京栈桥知识产权代理事务所(普通合伙) 11670

授权公告日 2022.12.23

优先权 CN202210208068(A) 20220304

内容摘要 本发明提供了一种利用功能土著菌群固体菌剂去除土壤中USEPA PAHs的方法，属于土壤修复技术领域。本发明以具有PAHs高效降解能力的功能土著菌群为对象，选取玉米秸秆为固定化载体，采用吸附法，制备具有PAHs降解能力的功能土著菌群固体菌剂，对土壤中PAHs具有较高的去除率，选用玉米秸秆为固定化载体，经过长时间的腐败，还可增加土壤肥力；本发明在综合考虑去除效率和成本的基础上，对总PAHs去除率可以达到88％，其中2?3环PAHs的去除率达到93％以上。

主权利要求 1.一种利用功能土著菌群固体菌剂去除土壤中USEPA PAHs的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、土著微生物菌群富集、驯化S1-1、土著微生物富集将长期受PAHs污染的土壤样品加入盛有无菌水的锥形瓶中，随后置于摇床中，在30-40℃的温度条件下，以150-160rpm的转速震荡培养6-8h，离心后，得到的上清液即为土著微生物菌液；S1-2、土著微生物驯化取5-6mL的土著微生物菌液转接至95-100mL培养基中，加入USEPA PAHs混标，使培养基中PAHs浓度达到设定值，在30-40℃的温度条件下，以150-160rpm速率在摇床上震荡培养5-6d，相同条件下连续培养5代后，获得稳定的具有高效降解PAHs能力的土著功能微生物菌群；S2、发酵罐培养S2-1、将上述土著功能微生物菌群转接至LB培养基中活化，在30-40℃的温度条件下，以150-160rpm的转速摇床震荡培养24-30h，作为一级种子液使用，按5wt％的接种量将一级种子液转接至发酵罐中进行放大发酵，培养至对数生长期，获得液体菌剂；S3、固体菌剂的研制选用玉米秸秆为固定化载体，按照重量比为1:10的比例称取玉米秸秆和液体菌剂，并置于锥形瓶中混合均匀，灭菌后冷却至常温，并置于恒温振荡培养箱内，在30-40℃的条件下，以150-160rpm的转速的培养2-3d后取出，随后在离心机中以5000-6000rpm的速率离心处理5-10min后，得到上清液和下层固体，然后，用无机盐洗涤下层固体，再离心5-10min后弃上清液，重复此过程2次，最终离心所得固体即为功能土著微生物菌群固体菌剂；S4、土壤的采集、污染老化从农田采集土壤样品，将采集的土壤样品风干30-40d后，磨碎并充分打散混匀，过20目筛，向制备好的土壤样品中添加含有USEPA PAHs和丙酮的混合溶液，并充分混匀，待丙酮挥发完全后，老化土壤3-4个月，保存备用，其中，USEPA PAHs占混合溶液总重量的25％，丙酮占混合溶液总重量的75％；S5、土壤接种向步骤S4得到的污染土壤中添加重量为2-5wt％的土著微生物菌群固体菌剂，并充分混匀后，监测污染土壤中PAHs含量的变化。

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