一种鸢尾科植物红葱VIGS沉默体系的构建方法及其应用

申请号 CN202111408255.8

专利名称 一种鸢尾科植物红葱VIGS沉默体系的构建方法及其应用

专利类型 发明 

年份 2022 

公开号 CN114107374A

公开日 2022.03.01

主分类号 C12N15/84

分类号 C12N15/61  C12N15/53  A01H6/00  C12N15/84  C12N15/54  A01H5/00 

申请日 2021.11.19

申请人 广东省林业科学研究院 

国家省市 广东 

联系地址 510520 广东省广州市天河区龙洞广汕一路233号

发明人 王丛丛  林国森  何春梅  王洪峰  苏凌业  徐明锋 

代理人 朱双

代理机构 广州智斧知识产权代理事务所(普通合伙) 44649

优先权 CN202111408255(A) 20211119

内容摘要 本发明公开了一种鸢尾科植物红葱VIGS沉默体系的构建方法及其应用。本发明以烟草脆裂病毒TRV作为VIGS体系的载体，以红葱八氢番茄红素脱氢酶基因作为目的基因，利用真空渗透处理方法成功创建了适合红葱的VIGS沉默体系；将该体系应用于开展红葱色素合成相关基因EbMYB5和EbMYB52基因功能研究，被侵染的沉默处理组样品叶片中EbMYB5、EbMYB52基因表达量显著降低，且与色素合成途径相关的关键基因表达量呈现出不同程度的显著变化，表明本发明的红葱VIGS沉默体系可以成功应用于红葱基因功能验证。本发明构建的红葱VIGS沉默体系对于红葱基因功能研究具有重要意义。

主权利要求 1.一种红葱VIGS沉默体系的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：a.将红葱目的基因特异性片段连接至pTRV2载体的多克隆位点上，获得pTRV2-目的基因特异性片段重组质粒，将重组质粒转化农杆菌，获得pTRV2-目的基因特异性片段农杆菌，培养收集菌体备用；b.用缓冲液分别将pTRV1农杆菌、pTRV2-目的基因特异性片段农杆菌的菌体重悬分散制成农杆菌菌液，然后将pTRV1农杆菌菌液与pTRV2-目的基因特异性片段农杆菌菌液混合为侵染液；c.将红葱植株洗净，吸干表面水分，完全浸泡于侵染液中，进行真空渗透处理；d.用无菌水清洗植株上多余的侵染液，然后将植株于20℃下黑暗培养24h，25℃黑暗条件下平衡24h，随后正常培养，构建得到红葱的目的基因VIGS沉默体系。

PDF文件 浏览全文