一种观察植物病原真菌侵染叶片的方法及应用

申请号 CN202111381069.X

专利名称 一种观察植物病原真菌侵染叶片的方法及应用

专利类型 发明 

年份 2022 

公开号 CN114216886A

公开日 2022.03.22

主分类号 G01N21/64

分类号 G01N1/30  G01N21/64  G01N1/28 

申请日 2021.11.20

申请人 云南农业大学  西南林业大学 

国家省市 云南 

联系地址 650000 云南省昆明市盘龙区黑龙潭

发明人 何霞红  杨宽  郭力维  黄红苹  王慧玲  叶坤浩  魏朝霞  朱有勇 

代理人 李冲

代理机构 北京盛凡佳华专利代理事务所(普通合伙) 11947

优先权 CN202111381069(A) 20211120

内容摘要 本发明公开了一种观察植物病原真菌侵染叶片的方法及应用，该方法选用104spores/mL的三七圆斑病菌分生孢子悬浮液喷洒接种植物叶片，分别取接种后0h、6h、12h、24h、48h和96h的植物叶片样品，并将一个叶片切成若干小块，取一块载玻片，用移液枪吸取卡尔科弗卢尔荧光增白剂点滴到载玻片上，再分别取相同量的10％的KOH溶液点滴到卡尔科弗卢尔荧光增白剂液滴上，将小块叶片正面朝下放于卡尔科弗卢尔荧光增白剂和KOH的混合液的液面上，在放有叶片的载玻片上，放上另外一个载玻片，用回形针将两个玻片固定在一起，静置放置1min，用倒置荧光显微镜在10×10倍和10×20倍镜下进行观察，该方法可用于观察真菌分生孢子在寄主植物叶部表面的萌发至侵入过程。

主权利要求 1.一种观察植物病原真菌侵染叶片的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1)接种：选用10 4 spores/mL的三七圆斑病菌分生孢子悬浮液喷洒接种植物叶片；步骤2)取样：分别取接种后0h、6h、12h、24h、48h和96h的植物叶片样品，并将一个叶片切成若干小块；步骤3)染色：取一块载玻片放在实验桌上，用移液枪吸取卡尔科弗卢尔荧光增白剂(CalcofluorWhite Stain)点滴到载玻片上，再分别取相同量的10％的KOH溶液点滴到卡尔科弗卢尔荧光增白剂液滴上，然后取步骤2中小块叶片正面朝下放于卡尔科弗卢尔荧光增白剂和KOH的混合液的液面上；步骤4)制片：在步骤3中所得放有叶片的载玻片上，放上另外一个载玻片，然后用回形针将两个玻片固定在一起，静置放置1min；步骤5)显微镜观察：用倒置荧光显微镜在10×10倍和10×20倍镜下进行观察。

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