TaqMan实时荧光PCR快速检测斑点叉尾鮰病毒

编号 zgly0000562633

文献类型 期刊论文

文献题名 TaqMan实时荧光PCR快速检测斑点叉尾鮰病毒

作者 李惠芳  刘荭  吕建强  蔡依娜  田飞焱  李香平  岳志芹  陈昌福 

作者单位 华中农业大学水产学院  广东省深圳出入境检验检疫局  山东出入境检验检疫局 

母体文献 长江大学学报：农学卷 

年卷期 2008,5(1)

页码 42-46

年份 2008 

分类号 S941.41  Q959.468 

关键词 斑点叉尾鮰(Ictalurus  Punctatus)病毒  实时荧光定量PCR  Taqman荧光探针  检测 

文摘内容 根据GenBank登录的斑点叉尾鮰病毒株ORF8基因序列,设计引物和Taqman荧光探针,建立了用于检测斑点叉尾鮰(Ictalurus Punctatus)病毒的实时荧光定量PCR方法;对实时荧光定量PCR反应条件进行了优化,评估了该方法的特异性、灵敏度和重复性,并建立了绝对定量方法。特异性试验证实,该方法只能检测到斑点叉尾鮰病毒,与真鲷虹彩病毒、蛙虹彩病毒、锦鲤疱疹病毒、鳜鱼传染性脾肾坏死病毒等多种常见的水生动物病毒没有交叉反应,具有高度的特异性。标准曲线表明,在3.3×10~3.3×107拷贝数之间有较好的线性关系(r=0.998 3),最少可检测到33个拷贝的阳性质粒,敏感度很高。同一样品于试验内及试验间的重复性试验发现,变异系数分别为0.7%和1.2%,重复性较好。该方法的检测时间从核酸抽提到出具结果仅需3h。试验结果表明,采用实时荧光PCR检测斑点叉尾鮰病毒方法具有特异性好、灵敏度高、检测耗时短的特点,并且能对病毒进行准确的定量分析,不仅适合口岸进出口检验检疫的需求,而且可以作为研究该病毒感染过程的有力工具。