大鼠脑胶质瘤荧光素酶动物模型建模细胞株C6-Luc的构建

编号 zgly0000745653

文献类型 期刊论文

文献题名 大鼠脑胶质瘤荧光素酶动物模型建模细胞株C6-Luc的构建

学科分类 220.1520;林木遗传学

作者 黄伟  吕明  李保卫  王玉丽  邵荣光  高钟镐 

作者单位 中国医学科学院＆北京协和医学院药物研究所  医药生物技术研究所  延边大学药学院 

母体文献 解放军医学杂志 

年卷期 2011,36(1)

页码 35-38

年份 2011 

分类号 R739.41 

关键词 荧光素酶类  萤火虫  生物发光成像  神经胶质瘤  模型  动物 

文摘内容 目的构建稳定表达萤火虫荧光素酶的大鼠脑胶质瘤细胞株C6-Luc。方法通过浓度梯度法测定C6大鼠脑胶质瘤细胞的潮霉素最佳筛选浓度。使用FuGENEHD转染试剂将表达荧光素酶的真核质粒pGL4.50转染至C6细胞,应用潮霉素筛选多克隆细胞株,进一步采用有限稀释法筛选单克隆细胞株。采用报告基因分析对单克隆细胞株进行阳性鉴定,并考察荧光素酶在阳性克隆中表达的稳定性。对阳性克隆进行体外生物发光检测,确定最小细胞检测量,并采用线性回归分析生物发光强度与细胞数量的相关性。将阳性克隆细胞种植于Wistar大鼠脑部,应用生物发光成像检测系统对肿瘤细胞在脑部的生长进行体内监测。结果 C6细胞的潮霉素最佳筛选浓度为250μg/ml。质粒pGL4.50成功转染至C6细胞,通过潮霉素抗性筛选得到12个单克隆细胞株。通过荧光素酶报告基因分析,成功鉴定了荧光素酶表达活性最高的阳性克隆,命名为C6-Luc,连续培养3代后C6-Luc细胞表达荧光素酶的活性无显著差异。体外生物发光检测结果显示C6-Luc细胞的最小检测数量为78个,细胞发光强度(y)与细胞数量(x)呈良好的线性关系,回归方程为y=81.348x-2143.1,相关系数r=0.997。体内生物发光检测结果显示,Wistar大鼠脑部种植C6-Luc细胞后,随肿瘤体积增大,大鼠脑部的发光强度逐渐增强。结论成功构建了稳定表达荧光素酶的大鼠脑胶质瘤细胞株C6-Luc。