酵母双杂交 BBTV DNA2 ORF诱饵质粒构建及其互作蛋白筛选

编号 zgly0001495703

文献类型 期刊论文

文献题名 酵母双杂交 BBTV DNA2 ORF诱饵质粒构建及其互作蛋白筛选

作者 余乃通  王健华  张雨良  周朋  刘志昕 

作者单位 中国热带农业科学院热带生物技术研究所农业部热带作物生物学与遗传资源利用重点实验室 

母体文献 植物病理学报 

年卷期 2015年04期

年份 2015 

分类号 Q78 

关键词 DNA2 ORF  酵母双杂交  质粒构建  自激活验证 

文摘内容 香蕉束顶病毒DNA2组分编码蛋白的功能尚不清楚,为了揭示其编码蛋白的功能,以本实验室保存的BBTV Haikou4分离物总DNA为模板进行PCR扩增,利用Gateway重组技术将BBTV DNA2 ORF构建到酵母双杂交系统(Pro QuestTM Two-Hybrid System,Invitrogen)的诱饵载体pDEST-32中,并通过酵母表型验证、诱饵质粒毒性验证以及自激活验证。结果显示,转有pDEST32-DNA2 ORF质粒的Ma V203酵母菌具有弱的自激活背景,在3-AT浓度为25 mmol/L的Se C-Leu-TrpHis平板上生长较弱,但在3-AT浓度为50 mmol/L Se C-Leu-Trp-His平板上不生长,表明诱饵质粒背景自激活可被浓度为50 mmol/L的3-AT所抑制。在该条件下共转pDEST32-DNA2 ORF和文库质粒到MaV203感受态细胞进行互作蛋白筛选,通过PCR和测序等手段最终鉴定35个候选蛋白基因,分别编码转录调控因子、生长发育相关蛋白、代谢相关蛋白、抗逆相关蛋白和未知蛋白等。酵母双杂交BBTV DNA2 ORF诱饵质粒的构建及其与寄主互作蛋白的筛选,为揭示DNA2组分的蛋白功能提供了科学线索。