间日疟疾传播阻断疫苗候选抗原Pvs25在家蚕杆状病毒表达系统中的表达

编号 zgly0001478186

文献类型 期刊论文

文献题名 间日疟疾传播阻断疫苗候选抗原Pvs25在家蚕杆状病毒表达系统中的表达

作者 盛稳稳  郭庆拓  陈剑清  崔立旺  张耀洲  于威  舒特俊  盛清 

作者单位 浙江理工大学生物化学研究所  宾夕法尼亚州立大学  天津市国际生物医药联合研究院  天津大学  浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室 

母体文献 蚕业科学 

年卷期 2014年04期

年份 2014 

分类号 S884.5 

关键词 间日疟原虫  Pvs25蛋白  传播阻断疫苗  家蚕杆状病毒表达系统  表面展示  多克隆抗体 

文摘内容 间日疟疾传播阻断疫苗候选抗原Pvs25是间日疟原虫有性生殖期表达的表面蛋白,可以抑制疟原虫在媒介按蚊体内的有性生殖及孢子增殖,有效地阻断疟疾病原从按蚊向人体的传播。为了探索该疫苗高效、低成本生产的新途径,进行了Pvs25在家蚕杆状病毒表达系统中表面展示表达的初步试验。首先将经过非功能区去除和密码子优化的间日疟原虫Pvs25基因克隆至转移载体pFastBacHTb,构建重组质粒pET32a-Pvs25并转化E.coli Rosetta菌株,诱导后成功表达了Pvs25蛋白,利用Ni-NTA亲和层析的方法纯化重组Pvs25蛋白,免疫BALB/c雌鼠制备多克隆抗体,利用Protein A抗体纯化柱纯化后的抗体经间接ELISA法测定其效价为1∶12 800;利用Bac-to-Bac系统构建含Pvs25基因的重组杆状病毒vBmPvs25,接种BmN细胞和家蚕5龄幼虫,经SDS-PAGE与Western blotting分析表明Pvs25在BmN细胞和幼虫中均成功表达;构建vBmgp64-CMV-Pvs25表面展示重组病毒,检测到Pvs25在BmN细胞中表达并展示于细胞和杆状病毒囊膜上。研究结果为利用家蚕杆状病毒表达系统生产间日疟疾传播阻断候选疫苗奠定了一定的试验基础。