地衣芽孢杆菌CP-16脂类水解酶的研究

编号 zgly0001562100

文献类型 期刊论文

文献题名 地衣芽孢杆菌CP-16脂类水解酶的研究

作者 李爽  张铁鹰  廖朝勇  梁争文  马霞飞  刘俊丽 

作者单位 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物营养学国家重点实验室  甘肃农业大学动物科学技术学院 

母体文献 动物营养学报 

年卷期 2017年11期

年份 2017 

分类号 S816.3 

关键词 地衣芽孢杆菌  脂类水解酶  角蛋白  羽毛脂质  克隆表达 

文摘内容 本试验旨在通过异源表达获得地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）CP-16的脂类水解酶,并探究其在羽毛降解过程中的作用。试验以地衣芽孢杆菌CP-16基因组DNA为模板,扩增脂类水解酶基因,转化入大肠杆菌中表达,获得重组酶L-4。研究重组酶L-4的适宜p H、p H稳定性、适宜温度、温度稳定性以及有机溶剂和金属离子对其相对活性的影响,同时探究其对角蛋白酶K水解天然羽毛角蛋白的作用。结果显示,获得的脂类水解酶基因大小为747 bp,编码248个氨基酸,在大肠杆菌中成功表达出重组酶L-4,其分子质量约为28.3 ku,酯酶活性为0.42 U/m L,适宜p H为6.5,适宜温度为50℃;在p H 6.59.5条件下处理30 min相对活性保持80%以上,在低于50℃温度条件下处理30 min相对活性保持70%以上。二价铁离子(Fe2+)、钠离子（Na+）、锰离子(Mn2+)、钙离子(Ca2+)对重组酶L-4相对活性具有激发作用,钡离子(Ba2+)、锌离子(Zn2+)、铜离子(Cu2+)、镍离子(Ni2+)对重组酶L-4相对活性具有抑制作用。当有机溶剂浓度为30%时,重组酶L-4在二甲基亚砜（DMSO）和甲醇中保存97%和85%的相对活性,在丙酮、乙醇中保存45%以上的相对活性,在异丙醇中保存不到20%的相对活性,而在乙腈中相对活性基本完全丧失。用重组酶L-4预处理天然羽毛底物,可提高角蛋白酶K对底物的水解效率,促进率为4.32%。由此可见,脂类水解酶可降解羽毛表层脂质,可在促进角蛋白酶水解羽毛角蛋白中发挥作用。