桔梗RAPD-PCR体系的正交优化及引物筛选

编号 zgly0001334702

文献类型 期刊论文

文献题名 桔梗RAPD-PCR体系的正交优化及引物筛选

作者 夏晓娟  王丽  魏建和  杨成民  褚庆龙  于婧 

作者单位 四川大学生命科学学院  中国医学科学院中国协和医科大学药用植物研究所 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2008年10期

年份 2008 

分类号 S567.239.035.3 

关键词 桔梗  RAPD  体系优化  正交设计  引物筛选 

文摘内容 【目的】建立桔梗RAPD-PCR反应的最佳体系并应用于桔梗遗传图谱的构建。【方法】以2个桔梗亲本GS16和GS106的叶片DNA为模板,对桔梗DNA的提取及对影响桔梗RAPD-PCR扩增的重要参数进行优化试验,并从530个随机引物中筛选出在2个亲本间具多态性的引物。【结果】叶片研磨后用蒸馏水预洗及2次沉淀时加入3 mol/L NaCl(pH 5.2)溶液,提取的基因组DNA纯度较高。优化的最佳反应体系总体积为25μL,内含ddH2O12.4μL、10×buffer 2.5μL、引物0.3μmol/L、dNTPs 200μmol/L、Mg2+2.5 mmol/L、TaqDNA聚合酶0.5 U、DNA模板40 ng;反应程序为:94℃预变性4 min;94℃30 s,35.3℃1 min,72℃2 min,40次循环;72℃10 min。按此优化RAPD条件成功地从530个随机引物中筛选出了115个在两亲本间具多态性的引物。【结论】改良的CTAB法能成功用于桔梗基因组DNA提取,建立的最佳反应体系可用于桔梗遗传图谱的构建。