欧洲山杨一号染色体显微分离、原位杂交分析及特异文库的构建

编号 zgly0000483172

文献类型 期刊论文

文献题名 欧洲山杨一号染色体显微分离、原位杂交分析及特异文库的构建

作者 张守攻  张勇  刘博  李秀兰  宋文芹  韩素英  齐力旺 

作者单位 中国林业科学院林业研究所细胞生物学实验室  南开大学生命科学学院 

母体文献 园艺学报 

年卷期 2006,33(4)

页码 794-800

年份 2006 

分类号 S678.1 

关键词 欧洲山杨  染色体  显微分离  特异性文库  荧光原位杂交 

文摘内容 以欧洲山杨(Populus tremula)根尖细胞为材料, 采用玻璃针分离法, 通过显微操作器成功地分离出一号染色体。将分离到的单条染色体去蛋白、Sau3A酶切, 并在染色体DNA片段两端加上Sau3A人工接头, 进行两轮PCR扩增, 得到了200～3000bp的DNA扩增片段。以DIG-dUTP标记的欧洲山杨基因组DNA为探针进行Southern杂交, 结果表明显微分离出的染色体扩增片段与欧洲山杨基因组DNA同源, 从而证明一号染色体DNA确实已被成功地扩增。以一号染色体第2轮PCR产物为探针进行荧光原位杂交, 发现荧光信号较密集的分布于一号染色体, 但同时荧光信号也出现在其它染色体的着丝粒及端粒区域。对第2轮PCR产物进行克隆, 构建单条染色体DNA文库, 经分析, 该微克隆文库包含约3×10^5个重组子。随机挑选160个重组子进行鉴定, 证明该文库的插入片段主要介于230～2200bp之间, 平均800bp。该文库的构建为欧洲山杨1号染色体特异探针的筛选、遗传图谱的构建、重要基因的克隆等研究奠定了基础。