嗜水气单胞菌溶血素A表达、免疫原性及活性检测

编号 zgly0001400756

文献类型 期刊论文

文献题名 嗜水气单胞菌溶血素A表达、免疫原性及活性检测

作者 赵秀敏  高勤学  陈鸿军  韩先干  丁铲 

作者单位 河南农业职业学院  江苏畜牧兽医职业技术学院  中国农业科学院上海兽医研究所 

母体文献 中国动物传染病学报 

年卷期 2011年01期

年份 2011 

分类号 S852.612 

关键词 嗜水气单胞菌  溶血素  克隆  表达  大肠杆菌 

文摘内容 根据已发表的嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila,Ah)溶血素A基因序列设计一对特异性引物,以TPS30菌株基因组为模板,通过PCR扩增溶血素A基因,经T-A克隆、序列测定和分析,结果表明,该基因包含1482 bp碱基,编码494个氨基酸。将溶血素A定向克隆至表达载体pET32a(+)中,构建重组表达质粒pET-THA,在IPTG诱导下成功获得重组表达蛋白His-GroEL,大小为68 kDa。对该质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达特性分析表明,最佳的诱导表达条件为:在0.1 mmol/L的IPTG浓度下,21℃诱导表达3 h。表达的溶血素A蛋白纯化后免疫小鼠,经Western blot检测,表明该蛋白具有免疫原性。对纯化的溶血素A蛋白复性后,进行溶血实验,结果表明该蛋白具有溶血活性。通过本实验的研究,为进一步研究嗜水气单胞菌溶血素的生物学功能奠定了基础。