齿兰环斑病毒RdRp基因的原核表达及多克隆抗体制备

编号 zgly0001659611

文献类型 期刊论文

文献题名 齿兰环斑病毒RdRp基因的原核表达及多克隆抗体制备

作者 万晴姣  刘倩  李欲轲  龚记熠  张宇斌  乙引  洪鲲 

作者单位 贵州师范大学生命科学学院  贵州省植物生理与发育调控重点实验室 

母体文献 植物病理学报 

年卷期 2019年01期

年份 2019 

分类号 S436.8 

关键词 齿兰环斑病毒  RdRp  原核表达  多克隆抗体 

文摘内容 采用RT-PCR法从感染齿兰环斑病毒（Odontoglossum ringspot virus,ORSV）贵州分离物的苋色藜叶片中扩增出病毒的依赖RNA的RNA聚合酶（RNA-dependent RNA polymerase,RdRp）基因保守序列。测序结果显示,该保守片段长516bp,编码171个氨基酸残基。构建了该片段的原核表达载体pET32a-ORSV RdRp并转化BL21（DE3）菌株,在25℃以0.4mmol·L-1IPTG诱导表达重组蛋白。SDS-PAGE分析表明,重组蛋白分子量约为36 kDa,与预测相符合。将该重组蛋白作为抗原免疫BABL/C小鼠,制备的多克隆抗体效价达1∶102 400。间接ELISA结果表明,该多抗具有较强的特异性,能检测到ORSV感染的病叶汁液中的RdRp,而与其它感染4种同属或不同属病毒的病叶汁液不发生血清学交叉反应,本实验为进一步研究RdRp的结构和功能以及从分子水平上探讨该病毒的致病机制奠定基础。