毛竹叶黄酮碳苷C-糖基化途径及C-糖基转移酶的分析

编号 zgly0001653527

文献类型 期刊论文

文献题名 毛竹叶黄酮碳苷C-糖基化途径及C-糖基转移酶的分析

作者 王源杰  郭雪峰  赵蕾  郭成  王煜炜 

作者单位 国际竹藤中心 

母体文献 林业科学 

年卷期 2018年12期

年份 2018 

分类号 S795.7 

关键词 毛竹  C-糖基转移酶  C-糖基化  异荭草苷  木犀草素 

文摘内容 【目的】毛竹叶中含有大量具有很强生物活性的黄酮碳苷,C-糖基转移酶（CGT）是黄酮碳苷生物合成代谢途径中C-糖基化的关键酶。本研究从毛竹叶中分离纯化CGT,研究毛竹叶黄酮碳苷的C-糖基化途径以及CGT的酶学性质和一级结构氨基酸序列特征,为后续深入研究毛竹叶中的CGT奠定良好的基础。【方法】通过硫酸铵分层沉淀、透析、葡聚糖凝胶过滤、阴离子交换层析、超滤脱盐等方法纯化CGT,使用SDS-PAGE进行检测。分别用圣草素查尔酮、圣草素、木犀草素作为底物,根据已建立的CGT催化的C-糖基化反应体系,进行可能的C-糖基化途径验证。运用Q-TOF检测分析和数据库搜索比对等方法,确认毛竹CGT的基因序列和一级结构氨基酸序列。【结果】毛竹叶黄酮碳苷CGT的分子量大约是50 kDa,酶反应体系最佳的反应时间是40 min,最佳反应温度是28℃,缓冲盐的最佳pH8.1,底物木犀草素的最佳浓度是31.76μmol·L-1。底物为木犀草素的反应体系在CGT催化下大量转化生成了异荭草苷,底物为圣草素查尔酮和圣草素的反应体系在CGT催化下大量转化生成了未知产物,只有少量转化生成异荭草苷。根据蛋白质质谱裂解规律和蛋白质碎片离子,解析出4个CGT肽段,并均可与毛竹基因（PH01000603G0510）编码的蛋白质氨基酸序列匹配,经数据搜索匹配,毛竹基因（PH01000603G0510）与水稻CGT基因（FM179712）匹配率为81%。【结论】通过对毛竹叶黄酮碳苷C-糖基转移酶提取、分离纯化及质谱鉴定得到可能的毛竹叶黄酮碳苷CGT基因序列（PH01000603G0510）。确定毛竹叶黄酮碳苷C-糖基化途径,主要途径是CGT催化木犀草素和UDP-葡萄糖直接合成异荭草苷,次要途径是CGT催化圣草素查尔酮和UDP-葡萄糖,或圣草素和UDP-葡萄糖间接合成异荭草苷。毛竹叶CGT极易催化生成C-6黄酮苷（异荭草苷）,而极少催化生成C-8黄酮苷（荭草苷）。