不同提取方法及上样量对牡丹试管苗茎基部蛋白双向电泳的影响

编号 zgly0000652649

文献类型 期刊论文

文献题名 不同提取方法及上样量对牡丹试管苗茎基部蛋白双向电泳的影响

学科分类 220.1070;森林植物学

作者 王海云  丁义  符真珠  何松林 

作者单位 河南农业大学林学院 

母体文献 基因组学与应用生物学 

年卷期 2010,29(1)

页码 91-96

年份 2010 

分类号 Q51 

关键词 牡丹  双向电泳  提取方法  上样量 

文摘内容 为建立一套适合于牡丹试管苗茎基部蛋白的双向电泳技术,以便更好地利用蛋白质组技术研究牡丹试管苗不定根的发生机理,本研究比较了三种不同蛋白质提取方法对双向电泳结果的影响,并在蛋白质上样量方面进行了比较。结果表明,乙酸铵/甲醇酚提取法所得2-DE图谱的蛋白点很少,仅检测到45个,且较模糊,有明显的拖尾现象,分辨率很低;乙醇/乙醚丙酮法所得的蛋白点也较少(101个),较模糊,且横竖纹干扰较大;三氯乙酸/丙酮法所得蛋白点数较多,可检测到434个清晰的蛋白点,且形状规则,重复性好,适合后续分析,操作也较为简便。用三氯乙酸/丙酮法提取蛋白,采用800μg、1000μg和1200μg三个不同的上样量进行双向电泳,在上样量为1200μg时(IPGpH3～10,24cm),蛋白质在12%SDS-PAGE胶上得到了较好的分离,在2-DE图谱上可分辨出562个蛋白点。因此,三氯乙酸/丙酮法是较适合于牡丹试管苗茎基部蛋白质提取的方法,1200μg是较为合适的上样量。