猪MSTN基因双筛选标记打靶载体的构建及其功能鉴定

编号 zgly0000807288

文献类型 期刊论文

文献题名 猪MSTN基因双筛选标记打靶载体的构建及其功能鉴定

学科分类 220.1520;林木遗传学

作者 王向鹏  肖一红  刘园园  杜永坤  马玉萍  周恩民 

作者单位 西北农林科技大学动物医学院  山东农业大学动物医学院 

母体文献 西北农林科技大学学报: 自然科学版 

年卷期 2012(8)

页码 47-53

年份 2012 

分类号 S813.3 Q782 

关键词 同源重组  基因打靶  猪肌肉生长抑素基因  双筛选标记 

文摘内容 【目的】:利用正负筛选策略,构建猪肌肉生长抑素(Myostatin,MSTN)基因的双筛选标记打靶载体。【方法】:以猪胎儿成纤维细胞DNA为模板,PCR扩增MSTN基因同源长、短臂;采用PCR和Overlap PCR扩增打靶载体正筛选标记嘌呤霉素和绿色荧光蛋白基因及负筛选标记单纯疱疹病毒胸苷激酶基因。以pUC57载体为骨架载体,在其多克隆位点连接一段包括Frt序列在内的酶切位点的多克隆位点序列,在2个Frt序列之间连接正筛选标记嘌呤霉素基因和绿色荧光蛋白基因,在Frt序列两侧分别连接5.7和1.9kb的MSTN基因同源长、短臂;在同源短臂后连接负筛选标记单纯疱疹病毒胸苷激酶基因,将目的片段与载体定向连接克隆。用脂质体法将打靶载体转染猪肾细胞(PK15细胞),用嘌呤霉素和丙氧鸟苷进行正负筛选,验证正负筛选标记基因的功能。【结果】:成功克隆了猪MSTN基因同源长、短臂及正筛选嘌呤霉素和绿色荧光蛋白基因及负筛选单纯疱疹病毒胸苷激酶基因,构建了猪MSTN基因双筛选标记打靶载体,打靶载体长14kb。在打靶载体转染的PK15细胞中,正负筛选标记基因均有生物学活性。【结论】:成功构建了猪MSTN基因双筛选标记打靶载体。