重组人可溶性PDGFRβ/Fc在昆虫细胞Sf9中的表达

编号 zgly0001371050

文献类型 期刊论文

文献题名 重组人可溶性PDGFRβ/Fc在昆虫细胞Sf9中的表达

作者 谢秋玲  刘兰  刘秀贵  张玲  徐丽慧  洪岸 

作者单位 暨南大学生物工程研究所  广东省生物工程药物重点实验室 

母体文献 昆虫学报 

年卷期 2009年07期

年份 2009 

分类号 Q78 

关键词 血小板源性生长因子受体  杆状病毒表达载体系统  昆虫细胞  重组蛋白  MTT法 

文摘内容 【目的】利用昆虫细胞Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达血小板源性生长因子受体β(PDGFRβ)链膜外区与人IgGFc片段的可溶性受体融合蛋白sPDGFRβ/Fc,并检测重组蛋白的特异性和生物活性。【方法】采用Bac-to-Bac系统,构建重组转移质粒pFastbac-sPDGFRβ/Fc,转化到含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac中,使目的基因与杆状病毒基因组DNA发生位点特异性重组,获得重组病毒DNA,将其通过脂质体转染昆虫细胞Sf9获得重组病毒。将该重组病毒感染Sf9无血清细胞系,在Sf9细胞中表达sPDGFRβ/Fc,对表达产物进行Western blotting检测和Protein A亲合层析纯化,并进一步通过MTT法检测获得的重组蛋白生物学活性。【结果】重组病毒感染Sf9细胞后,经Western blotting分析,能检测到一条分子量约为97kDa的特异性条带,与目的蛋白大小相符。通过ProteinA亲和层析,获得了纯度达75%以上,表达量为1μg/mL细胞培养上清的重组融合蛋白,MTT结果显示该重组融合蛋白sPDGFRβ/Fc具有抑制PDGF刺激的Balb/c3T3细胞增殖的能力。【结论】具有生物活性的重组可溶性受体融合蛋白sPDGFRβ/Fc可在昆虫细胞中成功地得到表达。