利用Gateway技术筛选Candidatus Liberibacter asiaticus致病相关基因研究

编号 zgly0001563449

文献类型 期刊论文

文献题名 利用Gateway技术筛选Candidatus Liberibacter asiaticus致病相关基因研究

作者 钱艳杰  刘敏  欧阳立力  王世玲  洪霓  王国平  丁芳 

作者单位 华中农业大学植物科学技术学院湖北省作物病虫害检测与安全控制重点实验室  华中农业大学国家果树脱毒种质资源室内保存中心 

母体文献 植物病理学报 

年卷期 2017年06期

年份 2017 

分类号 S436.66 

关键词 黄龙病菌  Candidatus Liberibacter asiaticus  致病相关基因  Gateway技术 

文摘内容 柑橘黄龙病是危害全球柑橘产业健康发展的最严重病害之一,病原为韧皮部限制性细菌,我国的柑橘黄龙病由亚洲种（Candidatus Liberibacter asiaticus,CaLas）引起。由于该病原菌难以获得离体纯培养,从而限制了其致病分子机制的研究。本试验根据已经报道的植物病原细菌致病相关基因特点,从黄龙病菌亚洲种Psy62菌株全基因组序列（Psy62:NC012985.1）中选取3个假定致病相关基因,分别标记为PalCa Las、MotCa Las和HlyCa Las,利用Gateway技术的同源重组原理,将3个基因通过BP反应和LR反应,分别构建到植物表达载体psk103中,接种本生烟（Nicotiana benthamiana）后,通过瞬时表达筛选可诱导N.benthamiana产生过敏性坏死反应的功能基因。经过PCR克隆和测序验证,PalCa Las,、MotCa Las和HlyCa Las基因均成功构建至植物表达载体上。本生烟瞬时表达试验证实:当含有目的基因的根癌农杆菌菌悬液OD600值介于0.60.8,测试本生烟苗龄6周左右,PalCa Las基因在接种4 dpi时可引发明显的HR（hypersensitive reaction）反应,12 dpi时HR反应更为强烈。同等条件下MotCa Las和HlyCa Las均不能引发类似反应。由此证实,Gateway技术可成功用于筛选CaLas致病相关基因,PalCa Las基因可能在CaLas致病过程中发挥重要作用。该报道为国内首次采用Gateway技术进行CaLas致病相关基因功能研究,为后续开展CaLas病原寄主互作分子机制研究奠定了基础。