小苍兰实时荧光定量PCR中的内参基因筛选

编号 zgly0001696264

文献类型 期刊论文

文献题名 小苍兰实时荧光定量PCR中的内参基因筛选

作者 丁苏芹  李玺  唐东芹 

作者单位 上海交通大学设计学院风景园林系 

母体文献 南京林业大学学报(自然科学版 

年卷期 2020年03期

年份 2020 

分类号 S682.29 

关键词 小苍兰  内参基因  实时荧光定量PCR  球茎  香雪兰属 

文摘内容 【目的】筛选适用于小苍兰实时荧光定量PCR的内参基因,为准确研究小苍兰基因表达,尤其是种球发育相关基因的表达分析提供参考。【方法】以小苍兰’上农金皇后’的花瓣、雌雄蕊、花葶、叶片、球茎、根等6个不同组织器官,5个不同发育时期的球茎以及不同外源激素处理后的球茎为材料,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法分析了小苍兰中8个常用持家基因的表达情况,进而利用geNorm、NormFinder以及BestKeeper等3个常用软件综合分析各基因表达的稳定性。【结果】在小苍兰’上农金皇后’6个不同的组织器官中,所选8个持家基因均有表达,但稳定性存在差异。综合分析表明,Actin和18S rRNA是最合适的内参基因,而EF-1β经3个软件分析均表现为最不稳定,不适合后续应用于小苍兰的基因表达分析。在5个不同发育时期的球茎组织中,表达最为稳定的是QCR、Actin和TUB,适宜今后研究球茎发育相关的基因表达特征时作为内参基因,而表达最不稳定的CYP和18S rRNA则不宜使用。在3种不同外源激素诱导下的小苍兰种球中,18S rRNA和CYP的表达水平相对一致且稳定性较好,可以用来作为内参基因进行相关目的基因的定量PCR研究,而EF-1β表达最不稳定,不推荐使用。【结论】综合来看,小苍兰基因表达研究中最适内参基因应根据不同情况而定,Actin和18S rRNA是分析不同组织器官中基因表达时的首选内参基因;QCR、Actin和TUB是研究不同发育时期球茎中基因表达的适宜内参基因;18S rRNA和CYP是研究外源激素诱导下基因表达的首选内参基因。